軟骨細胞におけるシンデカンおよびインテグリンを介するCTGFの作用機構の解明

阐明软骨细胞中多配体聚糖和整合素介导的 CTGF 的作用机制

基本信息

批准号：
12771105
负责人：
西田崇
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ヒト口腔扁平上皮癌細胞株HSCにCTGF遺伝子を強制発現させ、マクロアレイ解析を行ったところ、対照と比較して、インテグリンα_3β_1の遺伝子発現の上昇が確認された。2.ラットの成長板において、CTGFが増殖軟骨細胞層から肥大軟骨細胞層にかけて局在しているのに対し、ヘパラン硫酸は増殖軟骨細胞層から成熟軟骨細胞層にかけて局在することを明らかにした。3.ヒト軟骨細胞様細胞株HCS-2/8においてCTGFはヘパラン硫酸と局在が一致することを明らかにした。4.CTGFは特徴的な4つのモジュール構造、即ちIGFBP、vWC、TSP、CTモジュールで構成されているが、各モジュールの組換えタンパク質を作製し、ヘパリンがC末端モジュールであるCTに結合することを明らかにした。5.対数増殖期のHCS-2/8細胞にCTGFを添加するとDNA合成が冗進するが、ヘパリナーゼで前処理したHCS-2/8細胞ではCTGFのDNA合成促進作用は消失した。6.ヘパリナーゼで前処理したHCS-2/8細胞にCTGFを添加し、軟骨細胞の分化マーカーの一つであるアグリカンの発現をノーザンプロット法で解析すると、ヘパリナーゼで処理していないHCS-2/8細胞で見られるアグリカンの発現量の増加が認められなくなった。7.6.と同様の条件下でプロテオグリカンの合成量を^<35>S-硫酸の取り込みを指標にして測定すると、ヘパリナーゼで前処理したHCS-2/8細胞ではCTGFによるプロテオグリカン合成の促進効果が認められなかった。以上のことから、CTGFがHCS-2/8細胞に作用する際にヘパラン硫酸が必要であり、ヘパラン硫酸によって、CTGFの活性が制御されていることが示唆された。

1。CTGF基因被迫在人口服鳞状细胞癌细胞系HSC中表达，并进行了大阵列分析，与对照组相比，整联蛋白α_3β_1的基因表达被确认增加了。 2。据显示，在大鼠的生长板中，CTGF从增殖的软骨细胞层定位于肥厚的软骨细胞层，而硫酸乙酰肝素硫酸盐的定位是从增殖的软骨细胞层定位于成熟的软骨细胞层。 3。我们发现CTGF与硫酸乙酰肝素固定在人体软骨细胞样细胞系HCS-2/8中。 4。CTGF由四个独特的模块化结构组成，即IGFBP，VWC，TSP和CT模块，但是产生了每个模块的重组蛋白，并揭示了肝素与C-末端模块的结合。 5。在对数生长阶段中将CTGF添加到HCS-2/8细胞中重新定义了DNA合成，但是在用肝素酶预测的HCS-2/8细胞中，CTGF的DNA合成启动子的效应消失了。 6。当将CTGF添加到用肝素酶预处理预处理的HCS-2/8细胞中时，通过北部绘制方法分析了Aggrecan的表达，这是软骨细胞分化的标志之一，而在HCS-2/8细胞中观察到的AGGRECAN表达水平的升高未与Heparinase一起处理。在与7.6相同的条件下，当使用 ^<35> s-硫酸盐作为指数的掺入蛋白聚糖的合成时，使用肝素酶预测的HCS-2/8细胞，未观察到CTGF诱导的促进蛋白聚糖合成的促进。从上面，建议当CTGF作用于HCS-2/8细胞时，需要硫酸乙酰肝素，并且硫酸乙酰肝素调节CTGF的活性。