中枢神経のシナプス後部構造の形成

中枢神经系统突触后结构的形成

基本信息

批准号：
09780717
负责人：
林謙介
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

シナプスの後部、スパインは非常にアクチン繊維に富む構造で、常時形態変化をしていることが知られている。スパインの形成、形態変化にはスパインに局在するアクチン結合蛋白が重要な役割をしているに違いない。私はスパインのアクチン結合蛋白、ドレブリンに注目して研究を行った。(1) まず、ドレブリンのアクチン結合部位について知るために、CHO細胞に発現させたGFP-ドレブリンについて詳細な観察を行った。いろいろなドレブリン断片をGFPとつなげて発現させたところ、アクチン繊維の変成を起こす断片は、必ずアクチン繊維との結合を示した。つまり、アクチン繊維の変成を起こすためにはアクチン繊維との強い結合が必要であることがわかった。重なっていない断片の両方でアクチン結合とアクチン繊維変性が見られた。従って、ドレブリンのアクチン結合部位には、弱いアクチン結合サイトが複数、クラスター状に分布していると考えられる。アミノ酸残基233-317が、アクチン繊維への結合とアクチン繊維の変性を起こすのに十分であった。全長cDNAで見られるような、あらゆる変性(アクチンの詰まった細い突起の伸長、アクチン繊維の屈曲、輪状化)が見られた。つまり、この部分がドレブリンのアクチンへの作用に必要十分であることが分かった。(2) GFP-ドレブリンを初代培養神経細胞に入れると、スパインに局在し、スパインが長くなることは昨年度に報告した。今回は、アクチン結合部位を欠損させたドレブリンを作成し、GFPとつなげて神経細胞に導入した。GFPによる蛍光はスパインにも弱く見られたが、樹状突起により強く認められた。従って、ドレブリンがスパインに局在するためにはアクチン結合部位が必要であることがわかった。また、GFP-ドレブリンを発現して長くなったスパインが本当にシナプス後部なのかどうかを、シナプトフィジンの抗体で確認した。

突触的后部，脊柱，非常丰富肌动蛋白纤维，并且众所周知正在不断变化。肌动蛋白结合蛋白位于脊柱中，必须在脊柱的形成和形态形成中起重要作用。我研究了脊柱肌动蛋白组合蛋白，多酰胺和研究。（1）首先，为了了解drostin的肌动蛋白联合位点，我们对CHO细胞中表达的GFP甲甲氨基酸含量进行了详细观察。当各种Dredrulin片段与GFP连接时，引起肌动蛋白纤维转化的片段总是表明与肌动蛋白纤维的结合。换句话说，发现需要与肌动蛋白纤维具有强大的结合来引起肌动蛋白纤维的转化。在两个非重叠片段中都观察到肌动蛋白键合和肌动蛋白纤维变性。因此，认为多个弱肌动蛋白键位点在drovulin的肌动蛋白结合位点上分布在簇状的簇中。氨基酸残基233-317足以与肌动蛋白纤维结合和肌动蛋白纤维的变性。所有不同的变性（肌动蛋白的薄突出，肌动蛋白纤维的屈曲和环类型）如cDNA中所见。换句话说，事实证明，这部分对于dribrin的肌动蛋白来说是必要且足够的。（2）据报道，去年GFP甲脑位于第一个培养神经细胞中，该细胞位于脊柱和长脊柱中。这次，创建了具有肌动蛋白结合的部分的干铜并连接到GFP，以将其引入神经细胞。 GFP的荧光很容易受到脊柱的影响，但被通风投影强烈认可。因此，发现德雷林需要将肌动蛋白连接的位点定位在脊柱中。此外，Sinaptojin的抗体证实了Sinaptojin的抗体，以查看表达GFP甲甲化的长脊柱是否确实是突触的后部。