ヒト血中αシヌクレインの構造特性に基づく疾患鑑別法の開発

基于人血α-突触核蛋白结构特征的疾病鉴别方法开发

基本信息

批准号：
22K15650
负责人：
小関大地
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2027-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15650/
关键词：
αシヌクレインシヌクレイノパチー神経変性疾患

项目摘要

パーキンソン病(PD)や多系統萎縮症(MSA)等に代表されるシヌクレイノパチーは根治療法のない神経難病であり、進行を抑制する疾患修飾療法の開発を目指した診断法の開発は我が国の喫緊の課題である。近年シヌクレイノパチーの神経病理において、共通の原因タンパク質とされるαシヌクレイン(αSyn)凝集体がプリオン様の性質を示すことが明らかになってきた。そこで本研究では、プリオン病研究で提唱された「一多型一疾患仮説」をシヌクレイノパチーに拡張し、αSyn凝集体の構造と疾患表現型との関連性を解明することを目的としている。今年度は、異常タンパク質増幅技術として当教室が開発したRT-QUIC (Real-time quaking-induced conversion)法 (特開2018-159694) を応用することで、PD患者およびMSA患者の血中を循環する微量αSyn凝集体を増幅し、多元的な構造解析を実施した。その結果、各疾患のRT-QuIC産物について電子顕微鏡解析を行ったところ、αSyn凝集体の超微細構造が疾患によって異なることがわかった。また、αSyn凝集体の二次構造解析を行ったところ、円二色性スペクトルの違いを示唆する結果が得られた。興味深いことに、蛍光タグを有するαSynを発現するヒト培養細胞にRT-QuIC産物をトランスフェクションしたところ、αSyn凝集体が細胞内に伝播し、αSynを示す蛍光の形態が疾患によって異なることが明らかになった。そこで、NMR法を用いる患者血液由来αSyn凝集体の立体構造解析を実施すべくスケールアップ条件にてRT-QuIC法を実施したところ、高濃度のリコンビナントαSyn存在下では不均一なRT-QuIC産物を与えると同時に、患者検体中に含まれる疾患特異構造が増幅過程で失われている可能性が示唆された。

由帕金森氏病（PD）和多边萎缩（MSA）代表的Pachee是一种无根治疗的神经疾病，并且开发了旨在发展抑制进度的疾病修饰治疗的诊断方法。近年来，很明显，是一种常见的病因蛋白的αSyncrain（αSyn）骨料表明神经性sinkleino pachi中的prions的特性。因此，这项研究旨在扩大“一种型 - 一种型 - 一种型疾病假设”，该假设由prion病疾病研究对生存的pachi进行，并阐明了αsyn骨料和疾病表达类型的结构的相关性。今年，我们将通过应用RT Quic（实时快速诱导的转换）定律（特别开放的2018-159694）来循环PD和MSA患者的血液。放大并实施了多物结构分析。结果，每种疾病的RT Quic产物的电子显微镜分析表明，αsynCoarter的超细结构取决于疾病。此外，还获得了αSyn聚集体的二级结构分析，表明双重色谱存在差异。有趣的是，当用荧光标签表达αSyn的RT Quic产物转染时，αsyncoarion会传播到细胞中，表明αSyn的荧光形式根据疾病而差异。因此，当使用NMR方法对患者血液衍生的αSyn骨料进行三维结构分析实施RT-Quic方法时，均匀的RT-Quic产品在很高的情况下是不平衡的 - 浓缩的重新征用αSyn。