がん微小環境におけるDKK1/3-CKAP4シグナルの機能解明と新規治療法の開発

阐明DKK1/3-CKAP4信号在癌症微环境中的功能并开发新的治疗方法

基本信息

批准号：
22K15511
负责人：
佐田遼太
金额：
$ 3万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15511/
关键词：
DKK1 CKAP4 膵がん肝がん腫瘍免疫腫瘍微小環境 Wntシグナルがん微小環境

项目摘要

私共はWntシグナル制御因子である分泌蛋白DKK1の新規細胞膜受容体CKAP4を同定し、種々のがんにおいてDKK1-CKAP4シグナルによる細胞増殖機構を明らかにしてきた。難治性がんにおけるDKK1-CKAP4シグナルとがん微小環境との関連については世界中で解析が進んでいないが、近年、様々ながんの微小環境においてDKK1が免疫調節活性を示すことが報告されている。私は本研究において、DKK1-CKAP4シグナルと腫瘍免疫の関連に特に着目して解析を行っている。令和４年度はhydrodynamic tail vein injection（HTVi）法を用いてDKK1および活性型CTNNB1、MET遺伝子を正常免疫マウス肝臓に発現させ、多発肝がんを作製するモデルを確立した。核出した腫瘍を解析し、DKK1タンパクの発現と、マウス血液中への分泌を確認した。しかし対照腫瘍と比較してDKK1発現腫瘍で肝腫瘍のサイズや個数に有意な差を認めず、免疫組織染色による評価では腫瘍微小環境に浸潤するCD4/8陽性T細胞の数に有意な変化を認めなかった。そこで、複数のがんドライバー遺伝子の組み合わせ、及びネオアンチゲン遺伝子を同様にHTVi法で肝臓に導入するモデルを作製した。同モデルにおいて得られた多発肝がんは、導入した遺伝子をそれぞれ異なる割合で発現し、多彩な組織像を示すことを確認した。現在、同モデルにおいてDKK1-CKAP4シグナル依存性の表現型を解析中である。また私は令和4年度にドキシサイクリン誘導性にDKK1およびネオアンチゲンを発現するマウス膵がんオルガノイドを正常免疫マウスの同所に移植するマウス膵がんモデルを作製した。ネオアンチゲン発現によって抗腫瘍免疫応答を誘導することに成功しており、現在、DKK1発現単独による表現型を解析中である。

我们已经确定了一种新型的细胞膜受体CKAP4，一种分泌蛋白DKK1，一个Wnt信号调节剂，并在各种癌症中通过DKK1-CKAP4信号阐明了细胞增殖机制。尽管难治性癌症中DKK1-CKAP4信号与癌症微环境之间的关联尚未在全球范围内进行，但据报道，DKK1在各种癌症微环境中具有免疫调节活性。在这项研究中，我专注于DKK1-CKAP4信号与肿瘤免疫之间的关联。在2022年，使用流体动力学尾静脉注射（HTVI）方法，建立了一种模型来通过表达DKK1，活性CTNNB1来产生多肝癌。分析了成核肿瘤以确认DKK1蛋白的表达和分泌到小鼠血液中。然而，与对照肿瘤相比，表达DKK1的肿瘤的肝肿瘤的大小或数量没有显着差异，并且当通过免疫组织化学染色评估时，观察到浸润肿瘤微环境的CD4/8阳性T细胞的数量没有显着变化。因此，创建了一个模型，其中类似地使用HTVI方法将多个癌症驱动基因和新抗原基因的组合组合到肝脏中。已经证实，在该模型中获得的多种肝癌表达了引入基因的不同比例，显示了各种组织学图像。当前，该模型中正在分析DKK1-CKAP4信号依赖性表型。在2022年，我还创建了一个小鼠胰腺癌模型，其中表达强力霉素诱导的DKK1和新抗原的小鼠胰腺癌类器官被植入正常免疫小鼠中。它通过新抗原表达成功地诱导了抗肿瘤免疫反应，目前正在单独分析由于DKK1表达引起的表型。