DKK1/CKAP4シグナルを標的とした肝細胞癌に対する新規抗癌治療の開発

开发针对 DKK1/CKAP4 信号的新型肝细胞癌抗癌疗法

基本信息

批准号：
21K07123
负责人：
権英寿
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07123/
关键词：
肝細胞癌 DKK1 CKAP4 オルガノイド肝細胞癌サブタイプ

项目摘要

・肝細胞癌細胞株におけるDKK1-CKAP4シグナルによる腫瘍形成制御機構の解析DKK1、CKAP4を共に発現するHep3B、JHH7細胞を用いてsiRNA、shRNAによるDKK1、CKAP4のノックダウンを行った結果、細胞増殖が抑制され、その効果はDKK1、CKAP4発現によりレスキューされた。また、それらのノックダウンはAKT、ERKのリン酸化を抑制した。CKAP4モノクローナル抗体によるin vitroでの腫瘍細胞増殖への影響を評価した結果、Hep3B細胞の増殖はCKAP4抗体の投与により有意に抑制された。In vivoの実験系として、ヌードマウスを用いたゼノグラフトモデルを使用して抗CKAP4抗体の腫瘍抑制効果を評価した。Hep3B細胞を皮下移植したマウスに抗CKAP4抗体の静脈内投与を行った結果、IgGのみを投与した群と比較して腫瘍形成が有意に抑制された。・既存薬との併用による抗CKAP4抗体の抗腫瘍効果の検討現在、肝細胞癌の抗癌治療の主軸はアテゾリズマブ、ベバシズマブやレンバチニブへと移行している。今回当初予定していたソラフェニブから現在の主軸の一つのレンバチニブへ薬物を変更し、抗CKAP抗体との併用による抗腫瘍効果を検討した。同薬剤はAKT、ERK活性を抑制することで腫瘍増殖を抑制すると考えられている。In vitroの系において、Hep3B及びJHH7細胞に対するCKAP4のノックダウンに加えてレンバチニブを添加することで、増殖抑制効果の上乗せ効果を認めた。この結果から、DKK1-CKAP4シグナルとレンバチニブはそれぞれ異なる経路でAKT、ERK活性を抑制することで、相加的に腫瘍抑制効果を期待できると考えられた。ヌードマウスを用いたゼノグラフトモデルにおいても、Hep3B細胞による皮下腫瘍形成を抗CKAP4抗体、レンバチニブの投与は相加的に抑制した。

・肝细胞癌细胞系中DKK1-CKAP4信号的肿瘤形成控制机制分析使用表达DKK1和CKAP4的Hep3B和JHH7细胞，使用siRNA和shRNA敲低DKK1和CKAP4，结果通过表达DKK1来挽救细胞增殖。和CKAP4。此外，它们的敲除抑制了 AKT 和 ERK 的磷酸化。体外评价CKAP4单克隆抗体对肿瘤细胞增殖的效果的结果显示，通过给予CKAP4抗体，Hep3B细胞的增殖被显着抑制。作为体内实验系统，我们使用裸鼠的异种移植模型评估了抗CKAP4抗体的肿瘤抑制效果。与仅接受 IgG 的小鼠相比，皮下移植 Hep3B 细胞的小鼠静脉注射抗 CKAP4 抗体可显着抑制肿瘤形成。・检验抗CKAP4抗体与现有药物联用的抗肿瘤效果目前，肝细胞癌的抗癌治疗的支柱已转向阿特朱单抗、贝伐单抗和乐伐替尼。这次我们把药物从原来计划的索拉非尼改为目前主流药物之一的乐伐替尼，并研究其与抗CKAP抗体联合使用的抗肿瘤效果。该药物被认为通过抑制 AKT 和 ERK 活性来抑制肿瘤生长。在体外系统中，除了敲低 CKAP4 之外，向 Hep3B 和 JHH7 细胞中添加仑伐替尼还产生了额外的生长抑制作用。这些结果表明，DKK1-CKAP4 信号传导和乐伐替尼有望通过不同途径抑制 AKT 和 ERK 活性，从而具有附加的肿瘤抑制作用。在使用裸鼠的异种移植模型中，给予抗CKAP4抗体和仑伐替尼可进一步抑制Hep3B细胞的皮下肿瘤形成。