B型肝炎ウイルスゲノム挿入の新規検出法を利用したメカニズム解析

使用新的乙型肝炎病毒基因组插入检测方法进行机制分析

• 批准号: 22K15481
• 负责人: 深野 顕人
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: National Center for Global Health and Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15481/
• 关键词: B型肝炎ウイルス; HBV; 肝細胞がん; ゲノム挿入; インテグレーション

B型肝炎ウイルス（HBV）感染による発癌過程には、ウイルスゲノムが宿主ゲノムへ挿入される現象が関与していることが知られる。しかしウイルスゲノムの挿入部位や挿入DNA断片は多様であり、その形成メカニズムはほとんど明らかでない。またHBVゲノム挿入を検出・解析する現行法は、高価で技術的制約があるなどの欠点があり汎用性が未だ低い。そこで本研究ではまず網羅的かつ安価で簡便にHBVのゲノム挿入を検出できる新規手法を確立し、その手法を用いることによりゲノム挿入機構の解明を目指している。他のウイルスゲノム挿入を簡便に検出する新規手法を応用し、まずはHBV肝細胞癌由来細胞株から、既報と一致するHBVゲノム挿入部位が同定できることを示した。さらにHBVを感染させた細胞や肝がん患者検体で新規に発生するゲノム挿入も本法で同定できることを解析した。また現行法のhybrid-capture法での解析結果と比較したところ、本法ではより少ないシーケンス量で同等レベルの解析が可能であることが示唆された。また同定された挿入部位について特異的プライマーを設計し、元のDNAサンプルからキメラゲノムを増幅することで本法の解析精度を評価した。以上の検討により、本法を用いることでHBVゲノム挿入を現行法より安価かつ簡便に検出できると考えられる。今後、本法を用いたゲノム挿入の分子機構解析を進めることで、HBV感染由来の発がんメカニズム解明へ重要な知見が得られると期待できる。

众所周知，乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的致癌过程涉及病毒基因组插入宿主基因组。然而，病毒基因组中的插入位点和插入的DNA片段多种多样，其形成机制很大程度上未知。此外，目前检测和分析HBV基因组插入的方法存在价格昂贵、技术限制等缺点，通用性仍然较低。因此，在本研究中，我们首先建立了一种能够全面、廉价且容易地检测HBV基因组插入的新方法，并通过该方法来阐明基因组插入机制。通过应用一种新方法来轻松检测其他病毒基因组插入，我们首先证明可以从 HBV 肝细胞癌衍生细胞系中鉴定出与先前报道的位点一致的 HBV 基因组插入位点。此外，我们分析该方法还可以识别 HBV 感染细胞和肝癌患者样本中发生的新基因组插入。此外，与当前的混合捕获方法的分析结果进行比较表明，通过使用更少量的序列，该方法可以进行相同水平的分析。我们还针对确定的插入位点设计了特异性引物，并从原始DNA样本中扩增了嵌合基因组，以评估该方法的分析准确性。基于上述研究，人们认为使用这种方法比现有方法可以更便宜、更容易地检测 HBV 基因组插入。未来，通过利用该方法进一步分析基因组插入的分子机制，有望为阐明HBV感染引起的致癌机制获得重要知识。

项目成果

B型肝炎ウイルスゲノム挿入の新規検出法の確立

乙型肝炎病毒基因组插入检测新方法的建立

• 发表时间: 2022
• 作者: 深野 顕人;若江 亨祥;直 亨則;斎藤 益満;豊嶋 孝恵;坪田 昭人;相崎 英樹;松平 崇弘;木村 基;渡士 幸一;杉浦 亙;村松 正道
• 通讯作者: 村松 正道

NTCP多量体形成に着目したB型肝炎ウイルス内在化機構の解明

以NTCP多聚体形成为重点阐明乙型肝炎病毒内化机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 深野顕人;渡士幸一;村松正道
• 通讯作者: 村松正道

Amentoflavone inhibits hepatitis B virus infection via the suppression of preS1 binding to host cells

• DOI: 10.1111/1348-0421.13064
• 发表时间: 2023-03
• 期刊: Microbiology and Immunology
• 影响因子: 2.6
• 作者: Chie Aoki-Utsubo;Puguh Indrasetiawan;Kento Fukano;Masami Muramatsu;N. Artanti;M. Hanafi;H. Hotta-

Establishment of a novel method for analyzing hepatitis B virus DNA integration

乙型肝炎病毒DNA整合分析新方法的建立

• 发表时间: 2022
• 作者: Fukano K;Wakae K;Nao N;Saito M;Toyoshima T;Tsubota A;Aizaki H;Matsudaira T;Kimura M;Watashi K;Sugiura W;Muramatsu M
• 通讯作者: Muramatsu M

B型肝炎ウイルスcccDNAの変異頻度に関わるAPOBEC3ファミリーとUNGの解析

APOBEC3家族及UNG与乙型肝炎病毒cccDNA突变频率相关分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 喜多村 晃一;深野 顕人;Lusheng Que;Yingfang Li;若江 亨祥;村松 正道
• 通讯作者: 村松 正道