腎細胞癌のマ-カ-酵素ち特異的なモノクロ-ナル抗体の作製と臨床応用

肾细胞癌标志物和酶特异性单克隆抗体的制备及临床应用

基本信息

批准号：
01870068
负责人：
賀佐伸省
金额：
$ 3.58万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01870068/
关键词：
腎細胞癌モノクロ-ナル抗体硫酸化酵素糖脂質マ-カ-酵素

项目摘要

腎細胞癌は有効な腫瘍マ-カ-を持たず画像診断が主流であるため、早期癌あるいは良性腫瘍との区別には無力であり、またマススクリ-ニングには不向きである。腺癌組織の生化学的特性の一つは硫酸転移酵素の亢進による硫酸化糖脂質の増量であり、組織レベルでのこの特性は腎細胞癌で顕著である。糖脂質硫酸化酵素の活性は血清にも発現し、更に腎細胞癌血清で顕著に活性亢進が認められた(Eur.J.Biochem.,印刷中)。そのほかの癌では、胃癌、大腸癌、肺腺癌、子宮癌、膀胱癌、こうがん癌は正常レベルであったが、肝細胞癌のみが腎細胞癌より更に高値を示した。癌以外の他の肝疾患では肝硬変や肝炎は正常レベルであった事より、本酵素活性は腎細胞癌のみ成らず肝細胞癌の血清診断に有効である結果が得られた(J.Natl.Cancer Inst.,投稿中)。従来、本酵素活性の測定には煩雑な方法が用いられていたが、迅速かつ簡便な測定法を新たに開発した(Anal.Biochem.,1989)。しかし、酵素生成物である硫酸化糖脂質は血清蛋白に結合することから、血清酵素の測定のための改良法を開発した。本研究の課題である、本酵素に対するモノクロ-ナル抗体の作製は現在進行している。期限内に抗体の作製が不調に終わった原因は、既にラット腎で確立した精製法がヒト組織に応用できないという点にある。また、ヒト組織は剖検にり得ることが多く新鮮さに欠けるためか、酵素の回収率がきわめて低下していた。しかし、本酵素はヘパリンセファロ-スに強い親和性を持つことを明らかにしたので、正常及び癌血清数百mlより本酵素を精製している。モノクロ-ナル抗体の抗原は約50%精製度の酵素標品を用い、培養上清が酵素活性を免疫沈降で阻害するスクリ-ニング法でクロ-ンを検索している。本酵素の精製段階で、本酵素は脂質と結合し、かつ脂質によって不可逆的に活性発現が制御されていることが明らかになった(投稿準備中)。

由于肾细胞癌是图像诊断的主流，而没有有效的肿瘤MA-KA，因此可以区分早期癌症或良性肿瘤是无能为力的，并且不适合质量雕塑。腺癌组织的生化特征之一是由于增强硫酸酶酶的增强，硫酸盐的增加，组织水平的这种特征对于肾细胞癌而言是显着的。糖糖酶的活性也在血清中表达，肾磷脂癌血清（Eur.J.Biochem。，印刷）显着增加了活性。在其他癌症中，胃癌，大肠癌，肺腺癌，子宫癌，膀胱癌和癌症癌症处于正常水平，但只有肝细胞癌的价格高于肾脏细胞癌。在癌症以外的其他肝病中，肝硬化和肝炎处于正常水平，因此这种酶活性不仅用于肾细胞癌，而且在肝癌的血清诊断中有效（J.Natl。CancerInst。过去，使用复杂的方法来测量酶活性，但新开发了一种快速而简单的测量方法（Anal.Biochem。，1989）。但是，由于一种酶是一种与血清蛋白结合的硫酸盐脂质，因此开发了一种用于测量血清酶的改进方法。目前正在进行该酶的挑战，该酶的单色-NAR抗体生产。截止日期内抗体制备的原因是，已经用大鼠肾脏建立的精炼方法不能应用于人体组织。此外，人体组织可能是解剖学和缺乏新鲜度，并且酶的恢复速率大大降低。但是，这种酶已经从普通和数百毫升的消除癌症中进行了完善，因为它表明它对肝素法洛具有很强的亲和力。单色-naru抗体使用约50％纯化的酶靶标，并以雕塑蛋白的方法搜索培养上清液，其中酶活性抑制酶活性。在该酶的纯化阶段，据揭示了该酶与脂质结合，并且活性表达受脂质控制（以准备发布）。