DNAクロマトグラフィーによる簡便迅速な人獣鑑別 : 分子生物学的な咬傷解析法の開発

使用 DNA 色谱法简单快速地识别人类与动物：开发分子生物咬痕分析方法

• 批准号: 19H00318
• 负责人: 加藤 優子
• 金额: $ 0.35万
• 依托单位: 兵庫県警察本部刑事科学捜査研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19H00318/
• 关键词: イヌ唾液; 咬傷

近年、しばしばペットによる咬傷トラブルが話題になることがあるが、所属している科学捜査研究所でも例外ではなく、相談を受けることがある。しかし、客観的に咬傷の事実を証明するには、現在では咬傷痕と被疑動物の歯型の形態学的な比較が主であるが、咬傷痕が付く皮膚や衣服は変形性に富み、比較は難しい。また、発生件数が多いイヌは、唾液中のアミラーゼ活性が非常に低いため、咬傷部位に残る唾液のアミラーゼを指標とする検査が適用できず、咬傷痕の不鮮明な咬傷を科学的に証明することも困難であった。近年、咬傷部位のイヌの唾液をmRNAマーカーによる分子生物学的検査で検出する方法が報告されたが、科捜研の鑑定実務(資料からDNAを抽出しDNA型検査を行う)の流れを考慮すると、別にmRNAを抽出・逆転写反応してリアルタイムPCRで解析する系は、貴重な資料を追加消費する上、方法がやや煩雑で試薬・解析機器の維持もコストがかかる課題がある。そこで、実務に適用可能な分子生物学的な咬傷解析法の開発を目指し、資料からDNAとRNAを共抽出し、イヌの唾液を既報のイヌ唾液特異的mRNAマーカーを利用して、高額な解析機器を必要としないDNAクロマトグラフィーを用いた簡便な検査系を確立することを目的として本研究を計画した。本研究により、これまで解析が困難であった咬傷痕の不鮮明なイヌによる咬傷事例に対し、科捜研の実務レベルで適用可能な有効な咬傷解析法を提供することが可能となる。方法としては、【1】イヌ試料(唾液、対照として尿・皮膚片)の収集、【2】試料からのDNA・RNAの抽出、【3】cDNAの合成、【4】安価なendpoint PCRで標的cDNAを増幅、併せてリアルタイムPCRによりmRNAマーカーの発現量の確認やイヌDNAの定量等、【5】DNAクロマトグラフィーによる検出、を予定していた。都合により、【1】までしか達成できなかったが、収集した資料及び試薬は、今後、本研究の続きにおいて無駄なく使用予定である。

近年来，经常讨论宠物的咬伤问题，但可以在它们所属的科学调查研究所进行咨询。但是，为了客观地证明咬合，咬合标记的主要比较和可疑动物的牙齿类型是比较，但是带有咬合标记的皮肤和衣服富含畸形和比较。此外，具有大量病例的狗在唾液中具有非常低的淀粉酶活性，因此不可能将唾液淀粉酶作为指数进行测试，该指数仍留在咬合部位，科学证明了咬合咬伤也很困难。近年来，据报道，它通过分子生物学测试在咬合部位检测到狗唾液，分别使用mRNA标记来检测。其他有价值的材料，该方法有些复杂，维护试剂和分析设备的成本很高。因此，为了开发可以应用于实际工作的分子生物学分析方法，从材料中提取DNA和RNA，并且狗的唾液使用狗唾液特异性的mRNA标记很昂贵计划使用不需要设备的DNA色谱法建立一个简单的测试系统。通过这项研究，可以提供一种有效的叮咬分析方法，适用于Kasouken的实用水平，用于对咬伤不舒服的狗的咬合，到目前为止很难分析。作为一种方法，[1]收集狗样品（唾液，对比度），[2]从样品中提取DNA / RNA，[3] cDNA合成，[4]廉价的端点PCR。确认了mRNA标记的表达量，狗DNA的定量量等。通过实时PCR，[5] DNA色谱法。由于方便起见，只能达到[1]，但是收集的材料和试剂将在未来继续浪费的情况下使用。