犬固形腫瘍に対する低コストかつレディメイドで適応可能なCAR-T細胞製剤の開発

开发用于犬实体瘤的低成本、现成的 CAR-T 细胞制剂

基本信息

批准号：
20H03141
负责人：
加藤大貴
金额：
$ 11.23万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、申請者が同定してきた犬固形腫瘍に特異的に過剰発現する標的抗原であるHER2およびGPC1、PDPNを標的としたキメラ抗原受容体CAR-T細胞製剤を、犬T細胞株を用いて作製し、その製材化を目指している。本年度は作成したCARベクターの機能を検証するために、健常犬ドナーより採取した末梢血単核球から活性化犬T細胞を作成し、作成したCARベクターの遺伝子導入を試みた。末梢血単核球から活性化犬T細胞を作成するにあたって、複数の刺激試薬および培養液、添加サイトカインとその濃度など培養条件を検討し、活性化犬T細胞作成の最適な培養条件を同定した。作成した活性化犬T細胞は2ヶ月以上の長期に渡って、継代培養が可能であることがわかり、長期にわたる様々な検証に利用可能なT細胞の培養条件が確立できた。つぎに、活性化犬T細胞に遺伝子導入試薬およびRetroNectin法にて、遺伝子導入を試みたが、標準的なエンベロープでは犬T細胞への遺伝子導入が困難であったため、複数のエンベロープplasmidを入手し、比較検討を行った。その結果、効率的に犬T細胞への遺伝子導入が可能なエンベロープplasmidを同定でき、犬CAR-T細胞を作成できた。作成した犬T細胞と標的抗原を発現する犬腫瘍細胞株の共培養を行ったところ、抗原特異的なサイトカイン産生能の確認ができた。今後、抗原特異的な増殖能や細胞傷害活性などを確認するとともに、犬T細胞株への遺伝子導入を進めていく予定である。

在这项研究中，我们将使用犬T细胞系开发针对HER2、GPC1和PDPN的嵌合抗原受体CAR-T细胞制剂，这些抗原是申请人已确定的在犬实体瘤中特异性过度表达的靶抗原。使用木材制造材料并将其转化为木材。今年，为了验证所创建的CAR载体的功能，我们利用从健康狗捐献者收集的外周血单核细胞创建了活化的犬T细胞，并尝试将所创建的CAR载体进行基因转移。当从外周血单核细胞产生活化的犬T细胞时，我们研究了多种刺激试剂和培养基等培养条件，添加了细胞因子及其浓度，并确定了产生活化的犬T细胞的最佳培养条件。结果发现，生成的活化犬T细胞可以进行2个月以上的长期传代培养，并建立了可用于各种长期验证的T细胞培养条件。接下来，我们尝试使用基因转移试剂和RetroNectin方法将基因导入犬T细胞中，但使用标准包膜很难将基因导入犬T细胞中，因此我们获得了多个包膜质粒，进行了比较研究。。结果，我们能够鉴定出一种包膜质粒，可以有效地将基因转移到犬T细胞中，并能够产生犬CAR-T细胞。当产生的犬T细胞与表达靶抗原的犬肿瘤细胞系共培养时，证实了产生抗原特异性细胞因子的能力。未来，我们计划确认抗原特异性增殖能力和细胞毒活性，并将基因转移到犬T细胞系中。

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Podoplanin promotes the tumor growth of canine malignant melanoma via Rho-associated kinase signals

Podoplanin 通过 Rho 相关激酶信号促进犬恶性黑色素瘤的肿瘤生长

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Masahiro Shinada;Daiki Kato;Namiko Ikeda;Toshio Li;Yuka Kodera;Masaya Tsuboi;James Chambers;Kazuyuki Uchida;Yukinari Kato;Ryohei Nishimura;Takayuki Nakagawa.
通讯作者：
Takayuki Nakagawa.

犬前立腺癌細胞株を用いた新たな分子標的薬の探索

利用犬前列腺癌细胞系寻找新的分子靶点药物

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
青木　督;加藤大貴;池田凡子;品田真央;小寺優佳;李　捷生;太田峻介;高橋洋介;橋本裕子;坪井誠也;チェンバーズジェームズ;内田和幸;西村亮平;中川貴之
通讯作者：
中川貴之

新規腫瘍抗原GPC1特異的CAR-T細胞の開発及び抗PD-1抗体併用による複合免疫療法の検証

开发新型肿瘤抗原GPC1特异性CAR-T细胞并验证使用抗PD-1抗体组合的联合免疫治疗

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
嘉本諭;加藤大貴;品田真央;坪井誠也;池田凡子;青木督;小寺優佳;李捷生;太田崚介;高橋洋介;橋本裕子;チェンバーズジェームズ;内田和幸;金子美華;西村亮平;加藤幸成;中川貴之;二瓶浩一，梅田剛佑，飯島正富，土井宏育，五十嵐雅之，西川義文;加藤大貴
通讯作者：
加藤大貴

獣医複合免疫療法の未来(JONCOL; Japanese Journal of Clinical Oncology)

兽医联合免疫疗法的未来（JONCOL；日本临床肿瘤学杂志）