フィラリアを媒介しない蚊作出に向けたタイ王国における犬糸状虫の生態疫学調査

泰王国犬心丝虫生态流行病学调查，以产生不传播心丝虫的蚊子

基本信息

批准号：
19KK0175
负责人：
福本晋也
金额：
$ 11.73万
依托单位：
Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (B))
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-10-07 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19KK0175/
关键词：
犬糸状虫ヤブカベクター

项目摘要

本研究計画では対フィールドサンプルの解析により、フィラリアを媒介しない蚊の作出を目指し研究を行う。2021年度までの研究においてタイフィールドサンプルのネッタイシマカから遺伝学的手法を用いて、犬糸状虫を媒介する系統と媒介しない系統を分離する方法の確立に成功した。またこれらの系統をゲノムレベルで比較するため次世代シーケンサーを用いたGRAS-Di解析を行ったが、フィールド由来サンプルを用いたことによる遺伝的多様性のためにマスクされ、犬糸状虫感染性に対する表現型に対し有意な差異検出することはできなかった。そこでこの遺伝的バックグラウンドの多様性に起因するマスクの問題を解決するため、媒介系統・非媒介系統を兄妹交配することで、犬糸状虫媒介性・非媒介性ネッタイシマカ近交系の樹立を試みた。5-7世代の近郊化を行い、繁殖性と感染表現型の評価を行った。その結果、これらの近交系系統は正常な繁殖能力を維持していること、犬糸状虫に対する感染表現型を正しく遺伝していることが確認された。双方の表現型の蚊を交配し、F1・F2世代の感染表現型を個体レベルで解析後、個体毎にDNAを抽出、プールした。ある程度近交係数をたかめた媒介性・非媒介性のそれぞれの群についてGRAS-Di解析を行った。その結果前回の解析として有意な変異を持つゲノム領域が検出された。現在QTL-Seq解析も併せて行うことで責任ゲノム領域の推定を進めている。新型コロナウイルス感染症の影響により頓挫していたタイでの現地調査を再開することに成功した。現地協力研究者とともにタイ王国チェンマイ地方で約400検体のヤブカ幼虫を採集、DNAを抽出保存した。GRAS-DI・QTL-Seq解析の結果をもとにフィールド蚊のジェノタイピングを今後行う予定である。

该研究计划旨在开发不会通过分析配对的田间样品来介导心丝虫的蚊子。在截至2021年的研究中，我们已经成功建立了一种方法，将使用遗传技术在泰国田间样品中传播和非介导的犬丝状蠕虫与埃及埃及埃及的菌株分开。此外，使用下一代序列仪进行了GRAS-DI分析，以比较基因组水平的这些菌株，但是由于野外衍生的样品引起的遗传多样性，它被掩盖了，并且不可能在狗丝状感染的表型上存在显着差异。因此，为了解决遗传背景中这种多样性引起的掩蔽问题，我们试图通过介导的和非介导的菌株的兄弟姐妹交配来建立狗糖浆传播和非介导的育种物种。进行了5-7代进行郊区化，并评估了繁殖和感染表型。结果，已经确认这些近交菌株保持正常的生育能力，并且它们正确继承了狗丝状蠕虫的感染表型。两种表型的蚊子均已交配，并在单个水平上分析了F1和F2代的感染表型，并为每个个体提取并合并DNA。对每个介导的组和非介导的组进行了GRAS-DI分析，并具有一定的近交系数。结果，先前的分析揭示了具有显着突变的基因组区域。目前，还正在进行QTL-SEQ分析以估计负责的基因组区域。他们成功地恢复了泰国的现场调查，该调查由于19号的影响而停止了。在泰国的清迈地区收集了大约400个ROE幼虫标本，并提取并储存了DNA。我们计划根据GRAS-DI和QTL-seq分析的结果，将来将蚊子的基因分型。