Novel roles of seminolipid in the mouse testis

精磷脂在小鼠睾丸中的新作用

基本信息

批准号：
21H02379
负责人：
高島誠司
金额：
$ 11.07万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は２つの課題に対し以下に記すアプローチを行った。①雄性生殖細胞合胞体形成におけるセミノリピドの役割解明セミノリピド欠損精巣で出現する多核巨細胞は生殖細胞合胞体の形成異常によるものと推察される。初年度においてこの現象が生殖細胞分化のどの段階で起こるかを検証した結果、精母細胞のZygotene-mid Pachytene期にこれが出現することを突き止めた。本年度は細胞間架橋がどのステージで変容をきたすかを解析した。細胞間架橋の局在を蛍光免疫染色により解析したところ、セミノリピド欠損マウスでは初期精母細胞ですでに多核化を始めておりこの時細胞間架橋構成分子TEX14の局在が変容し架橋とは異なる位置の細胞表面に局在していることを見出した。このことはセミノリピドが細胞間架橋構成分子の局在制御に加担する可能性を示唆している。②血液精巣関門制御におけるセミノリピドの役割解明本年度は、電子顕微鏡観察による血液精巣関門の観察を行なった。結果、セミノリピド欠損精巣でも機能的な密着結合の存在を示す『発達したアクチン繊維に裏打ちされた細胞膜のキッシング構造』が確認された。このことは、セミノリピド非存在下でも密着結合を構築することができることを示している。そこで次に、密着結合の連続性の有無をホールマウント免疫染色で観察したところ、セミノリピド欠損精巣でも連続した密着結合帯の形成が確認された。しかしこの時、結合装置を裏打ちするアクチン繊維の束にほつれのようなものが見られた。

今年，我们针对两个问题采取了以下措施。 ① 阐明精卵脂在男性生殖细胞合胞体形成中的作用精卵脂缺乏的睾丸中出现的多核巨细胞推测是由于生殖细胞合胞体形成异常所致。通过验证第一年这种现象发生在生殖细胞分化的哪个阶段，我们发现它出现在精母细胞的合子期-粗线期中期。今年，我们分析了细胞间桥在什么阶段发生变化。通过免疫荧光染色分析细胞间桥的定位发现，在精浆脂缺陷小鼠中，早期精母细胞已经开始多核化，此时构成细胞间桥的分子 TEX14 的定位发生了改变。发现交联位于细胞表面。这表明，精磷脂可能参与构成细胞间桥的分子的定位控制。 ② 阐明精磷脂对血睾屏障的调节作用今年，我们利用电子显微镜观察了血睾屏障。结果，即使在缺乏精浆脂的睾丸中，也证实了“细胞膜中衬有发达肌动蛋白纤维的接吻结构”，表明功能性紧密连接的存在。这表明即使在没有半脂脂的情况下也可以构建紧密连接。接下来，我们使用整体免疫染色观察了紧密连接的连续性是否存在，并证实了即使在缺乏精卵脂的睾丸中也形成了连续的紧密连接区。然而，此时，在结合装置内衬的肌动蛋白纤维束中观察到类似磨损的情况。