遊走誘導型CARによる脳疾患治療基盤技術の開発

开发利用迁移引导的CAR治疗脑疾病的基础技术

• 批准号: 21H01735
• 负责人: 河原 正浩
• 金额: $ 10.98万
• 依托单位: National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H01735/
• 关键词: キメラ抗原受容体; 脳疾患; 遊走; シグナル伝達; 細胞治療

昨年度は、遊走誘導型キメラ抗原受容体として、細胞外ドメインに一本鎖抗体、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインにケモカイン受容体もしくは増殖因子受容体を配したコンストラクトを構築し、細胞で安定発現させた。トランスウェル遊走アッセイによる間接的な遊走活性評価を行った結果、増殖因子受容体を用いた遊走誘導型キメラ抗原受容体の方が抗原に応答して高い遊走活性を有していた。本年度は、より直接的に遊走活性を評価する系の構築を目指した。遊走誘導型キメラ抗原受容体発現細胞をマルチウェルプレートに播種し、抗原を添加後に細胞が沈降するのを待ち、インキュベータ内に設置した顕微鏡でタイムラプス撮影を行った。撮影した画像を時系列順に繋げて動画を作成し、細胞形態の経時的な変化を可視化した。その結果、抗原を添加しない場合には、観察時間を通して細胞が比較的丸い形状のままであったのに対して、抗原を添加した場合には、観察時間中に細胞が仮足を伸ばして変形しており、運動性が亢進していることが示された。この抗原依存的な細胞の変形は、トランスウェル遊走アッセイの結果と相関した。以上より、細胞の形態観察による遊走活性の評価系を新たに構築することができた。

去年，作为一种矿物诱导的嵌合体抗原受体，具有单链抗体，穿孔结构域和细胞内结构域的构建体，并布置了带有趋化因子受体或增殖因子受体的构建体，细胞稳定。 ta。由于通过Transway分析的间接游戏活性评估，使用增殖因子受体诱导的嵌合体抗原受体对抗原做出了反应，并且具有较高的发挥活性。在这个财政年度，我们旨在建立一个可以直接评估播放活动的系统。播种诱导的嵌合体抗原 - 时期型受体表达细胞被播种在多层板板上，等待细胞在添加抗原后沉降，并在孵化器中安装显微镜时进行时间流逝。视频是通过按时间顺序连接照片的图像以及单元格形式加班变化的可视化创建的。结果，如果未添加抗原，则在观察时间内保持相对圆形的形状，而添加了抗原，在观察时间内将细胞拉伸以使运动性增强。这种依赖于抗原的细胞变形与Transwell Musica的结果相关。从以上，新构建了通过观察细胞形式进行游戏活动的新评估系统。

项目成果

細胞内蛋白質間相互作用検出法KIPPISの開発

开发 KIPPIS，一种检测细胞内蛋白质-蛋白质相互作用的方法

• 发表时间: 2021
• 作者: 河原正浩;鹿島大揮
• 通讯作者: 鹿島大揮

次世代創薬研究について

关于下一代药物发现研究

• 发表时间: 2022
• 作者: 平尾佳那絵;佐々木成朗;河原正浩
• 通讯作者: 河原正浩

チロシンキナーゼ内包型デザイナー受容体の開発

含有酪氨酸激酶的设计受体的开发

• 发表时间: 2023
• 作者: 河原正浩;コンクローントーン タットポーン
• 通讯作者: コンクローントーン タットポーン

細胞創製時代のバイオ計測

细胞创造时代的生物测量

• DOI: 10.34565/seibutsukogaku.99.6_291
• 发表时间: 2021
• 期刊: Seibutsu-kogaku Kaishi
• 作者: Kogawa Masato;Nishikawa Yohei;Saeki Tatsuya;Yoda Takuya;Arikawa Koji;Takeyama Haruko;Hosokawa Masahito;河原正浩
• 通讯作者: 河原正浩

偽陰性の少ない細胞内蛋白質間相互作用検出法の開発

开发假阴性较少的细胞内蛋白质-蛋白质相互作用检测方法

• 发表时间: 2022
• 作者: 河原正浩;鹿島大揮
• 通讯作者: 鹿島大揮