抗体-受容体キメラを用いた細胞運命制御システムの一般化

使用抗体-受体嵌合体的细胞命运控制系统的推广

基本信息

批准号：
17760619
负责人：
河原正浩
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17760619/
关键词：
抗体受容体キメラ非血球細胞増殖制御物質生産

项目摘要

これまで我々が取り組んできた抗体-受容体キメラはすべて血球系細胞で発現させていた。本研究では抗体-受容体キメラの汎用化を目指し、血球系細胞株以外の細胞株でキメラ受容体を発現させ、機能性を確認することを目標とした。具体的には、細胞株としては物質生産細胞として汎用的なチャイニーズハムスター卵巣組織由来の細胞株CHO、マウス線維芽細胞株NIH3T3を用いて検討した。キメラ受容体としてはこれらの細胞で既にシグナル伝達が行われることが確認されているインシュリン受容体(IR)、コロニー刺激因子-1受容体(c-fms)、上皮成長因子受容体(EGFR)を用いてキメラ受容体を作製した。これらのキメラ受容体の構造は、エリスロポエチン受容体のEpo認識細胞外ドメインを抗フルオレセイン抗体一本鎖抗体ScFvで置換し、膜貫通および細胞内ドメインをIR、EGFR、もしくはc-fmsに置換したものである。構築したキメラ受容体発現ベクターをまずは血球細胞株Ba/F3で機能解析した結果、IRキメラは抗原であるフルオレセイン標識BSA(BSA-Fl)によって増殖が抑制されたが、c-fms, EGFRキメラにおいては抗原依存的に増殖が促進された。そこで、同じベクターをリポフェクション法によってCHOまたはNIH3T3細胞に導入し、抗生物質で遺伝子導入細胞を選択後、増殖アッセイを行って機能評価を行った。その結果、CHO細胞に関しては現在のところBSA-Flの添加による明確な増殖促進効果は見られていないが、NIH3T3細胞においてはc-fms, EGFRキメラ導入細胞においてBSA-Fl依存的な増殖促進効果が確認された。このことから、抗体-受容体キメラを用いて非血球細胞を増殖制御することに初めて成功したことが示唆された。

到目前为止，我们研究的所有抗体-受体嵌合体都在血细胞中表达。在这项研究中，我们的目的是通过在血细胞系以外的细胞系中表达抗体-受体嵌合体并确认其功能来推广抗体-受体嵌合体。具体而言，该研究使用来自中国仓鼠卵巢组织的细胞系CHO（一种通用物质生产细胞系）和小鼠成纤维细胞系NIH3T3进行。嵌合受体包括胰岛素受体(IR)、集落刺激因子1受体(c-fms)和表皮生长因子受体(EGFR)，它们已被证实在这些细胞中进行信号转导。下面的方法。这些嵌合受体的结构包括用抗荧光素单链抗体ScFv替换促红细胞生成素受体的Epo识别胞外结构域，并用IR、EGFR或c-fms替换跨膜和胞内结构域。我们首先对构建的嵌合受体表达载体在血细胞系Ba/F3中进行了功能分析，发现IR嵌合体的增殖被抗原荧光素标记的BSA（BSA-Fl）抑制，但IR嵌合体的增殖被抗原荧光素标记的BSA（BSA-Fl）抑制。 c-fms和EGFR嵌合体以抗原依赖性方式促进增殖。因此，通过脂转染将相同的载体导入CHO或NIH3T3细胞，并用抗生素选择转染的细胞后，进行增殖测定以评价其功能。结果，对于CHO细胞，通过添加BSA-Fl没有观察到明显的生长促进作用，但是对于NIH3T3细胞，在c-fms、EGFR嵌合体中观察到BSA-Fl依赖性生长促进作用。确认转染细胞。这表明使用抗体-受体嵌合体首次成功控制非血细胞的增殖。