抗体-受容体キメラを用いた細胞運命制御システムの一般化

使用抗体-受体嵌合体的细胞命运控制系统的推广

基本信息

批准号：
17760619
负责人：
河原正浩
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17760619/
关键词：
抗体受容体キメラ非血球細胞増殖制御物質生産

项目摘要

これまで我々が取り組んできた抗体-受容体キメラはすべて血球系細胞で発現させていた。本研究では抗体-受容体キメラの汎用化を目指し、血球系細胞株以外の細胞株でキメラ受容体を発現させ、機能性を確認することを目標とした。具体的には、細胞株としては物質生産細胞として汎用的なチャイニーズハムスター卵巣組織由来の細胞株CHO、マウス線維芽細胞株NIH3T3を用いて検討した。キメラ受容体としてはこれらの細胞で既にシグナル伝達が行われることが確認されているインシュリン受容体(IR)、コロニー刺激因子-1受容体(c-fms)、上皮成長因子受容体(EGFR)を用いてキメラ受容体を作製した。これらのキメラ受容体の構造は、エリスロポエチン受容体のEpo認識細胞外ドメインを抗フルオレセイン抗体一本鎖抗体ScFvで置換し、膜貫通および細胞内ドメインをIR、EGFR、もしくはc-fmsに置換したものである。構築したキメラ受容体発現ベクターをまずは血球細胞株Ba/F3で機能解析した結果、IRキメラは抗原であるフルオレセイン標識BSA(BSA-Fl)によって増殖が抑制されたが、c-fms, EGFRキメラにおいては抗原依存的に増殖が促進された。そこで、同じベクターをリポフェクション法によってCHOまたはNIH3T3細胞に導入し、抗生物質で遺伝子導入細胞を選択後、増殖アッセイを行って機能評価を行った。その結果、CHO細胞に関しては現在のところBSA-Flの添加による明確な増殖促進効果は見られていないが、NIH3T3細胞においてはc-fms, EGFRキメラ導入細胞においてBSA-Fl依存的な増殖促進効果が確認された。このことから、抗体-受容体キメラを用いて非血球細胞を増殖制御することに初めて成功したことが示唆された。

我们一直在研究的所有抗体受体嵌合体都在血细胞系中表达。在这项研究中，目的是使抗体受体嵌合体普遍，并在血细胞系以外的其他细胞系中表达嵌合受体并确认其功能。具体而言，使用源自中国仓鼠卵巢组织和小鼠成纤维细胞系NIH3T3的通用细胞系对细胞系进行了检查，作为产生物质的细胞。使用胰岛素受体（IR），刺激因子-1受体（C-FMS）和表皮生长因子受体（EGFR）制备嵌合受体，这些受体已被证实会在这些细胞中引起信号传导。这些嵌合受体的结构是，促炎素受体的EPO识别的细胞外结构域被抗氟氟甲基菌抗体单链抗体SCFV取代，而跨膜和细胞内域则由IR，EGFR，EGFR，EGFR，或C-F替换。首先使用血细胞系BA/F3分析构建的嵌合受体表达载体，尽管IR嵌合体的增殖被抗原荧光素标记的BSA（BSA-FL）抑制，但C-FMS和EGFR嵌合体促进了抗原依赖抗原依赖的生长。因此，通过LiPofection方法将相同的载体转移到CHO或NIH3T3细胞中，并使用抗生素选择基因转导的细胞，并通过增殖测定法进行功能评估。结果，由于添加了BSA-FL，尚未发现CHO细胞具有增殖作用，但是在NIH3T3细胞中，已经证实，在C-FMS和EGFR Chimeric细胞中，BSA-FL依赖性促进促进效应是BSA-FL依赖性促进效应。这表明，使用抗体受体嵌合体控制了非血细胞细胞的增殖的首次成功操作。