自己と非自己の認識を撹乱させる寄生蜂による宿主への侵入の仕組みの解明

阐明寄生蜂入侵宿主破坏自我和非自我识别的机制

基本信息

批准号：
20K20571
负责人：
天竺桂弘子
金额：
$ 16.64万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-07-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、cDNAクローニングし配列決定した組織親和的侵入に関わる因子の特性解析および、RNA干渉の手法の構築を試みた。最初に、キンウワバトビコバチの組織親和的侵入に関わる因子のmRNA発現の挙動を調べたところ、桑実胚の時期のみ、その発現が上昇し、多胚になると、その発現が低下することが明らかになった。また、幼若ホルモンJHをキンウワバトビコバチ胚子培養系に添加し、キンウワバトビコバチの組織親和的侵入に関わる因子のmRNA発現の挙動を調べたところ、その発現が低下した。このことから、キンウワバトビコバチの組織親和的侵入に関わる因子は、宿主の発育段階において、JHの影響を受けることが強く示唆された。次に、RNA干渉の手法の構築を試みた。桑実胚培養系にdsRNAを添加し、キンウワバトビコバチの組織親和的侵入に関わる因子の転写産物の発現量を定量RT-PCRを用いて検討した。その結果、転写産物の発現量が低下し、RNA干渉が成功したと考えられた。現在、さらに発現を低下させる手法を検討している。また、組織親和的侵入に関わる因子の部分配列を用いて作製した抗血清と、組換えタンパク質または、キンウワバトビコバチ胚子を用いて交差性を検討したところ、交差性が確認できなかった。そのため、部分配列の位置を変更し、抗体を作り直し、交差性を確認する予定である。昨年度に引き続き、キンウワバトビコバチ胚子による寄主胚子侵入を検討するアッセイ系の構築を試みた。しかし、健康な宿主個体およびキンウワバトビコバチを確保できなかったこと、機器故障等のトラブルに見舞われ、十分に検討ができなかった。

今年，我们试图分析与cDNA克隆的组织入侵和到达有关的因素的特征，并构建一种RNA干扰方法。首先，当检查与金氏菌的组织入侵有关的因子的mRNA表达时，桑树胚胎的表达仅在桑bry胚的时候上升，当它变成多样性时，表达可能会降低揭示。另外，当将年轻的激素JH添加到Kinwabatobikobachi胚胎原培养系统中，以及与Kinwabatobikobachi的组织入侵有关的因子的mRNA表达的行为时，表达降低了。这表明，与组织入侵的因素有关，Kinwabatobikobachi受到了宿主阶段的JH影响。接下来，我们尝试构建RNA干扰方法。将dsRNA添加到桑berryo培养系统中，并使用定量RT-PCR检查了组织入侵Kinwatobikobachi组织所涉及的因子的转录量。结果，人们认为转录产物的量减少了，RNA干扰成功。目前，我们正在考虑一种进一步减少表达的方法。此外，使用抗脑料进行了使用抗脑料进行检查时，使用涉及组织入侵的因子，重组蛋白或Kinwabatobi Bikobachi胚胎进行的抗脑料进行检查时，未确认交叉点。因此，将改变部分序列的位置，将重新创建抗体，并确认交叉点。从去年开始，我们试图建立一个测定系统，以考虑入侵Kinwabatobikobachi胚胎原。但是，他无法确保健康的寄主个人和Kinwabato Biko甲虫，也无法充分考虑它。