アルツハイマー病分子病態の解明:カイコモデル系によるアプローチ

阐明阿尔茨海默病的分子病理学：利用蚕模型系统的方法

基本信息

批准号：
18890212
负责人：
天竺桂弘子
金额：
$ 1.68万
依托单位：
Meiji Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は,アルツハイマー病関連遺伝子カイコオルソログ,14-3-3epsion(14E),zeta(14Z)について機能解析を行った。はじめに,絹糸腺を二次元電気泳動で分離し,Xpress-tagged14-3-3plobeと反応するスポットについて解析したところ,カイコHeat Shock Protein 60(BmHSP60)であることが明らかとなった。HEK293細胞に14Eまたは,14ZとBmHSP60を共発現させ,免疫沈降法により,両者の結合を確認することができた。さらに,BmHSP60と14Eの結合部位を探索するために,BmHSP60のN末端部位(2-261)およびC末端部位(262-572)の組み換えタンパク質を作製し,同様の方法で両者の結合を検討した。その結果14Eは,BmHSP60のN末端部分とリン酸化非依存的に結合することが明らかとなった。次に,カイコ発生ステージおよび5齢幼虫期間の主要な組織における,14E,14Z,BmHSP60の発現をウエスタンブロティングで検討した。14E,14Z,BmHSP60ともに全発生ステージの主要な組織で高発現していることが明らかとなった。14-3-3は細胞シグナル伝達を担う分子アダプターである。一方Hsp60はタンパク質フォールディングを制御する分子シャペロンである。両者の結合は,カイコ細胞におけるタンパク質成熟と機能発現の連携に重要な役割を果たしていると思われた。この研究成果は,Neuroscience Researchに投稿した(印刷中)。

今年，对与阿尔茨海默氏病有关的基因Kaikooru Solog进行了功能分析，14-3-3-3-3- epsion（14e），Zeta（14Z）。最初，已经分析了通过二维电子游泳分离的斑点并对Xpress标记的14-3-3-3plobe响应，分析了它是蚕热蛋白60（BMHSP60）。 HEK293细胞通过14E或14Z和BMHSP60 co -co，通过免疫沉积法确认了两者的结合。此外，为了探索BMHSP60和14E之间的结合位点，制备了N末端部分（2-261）的重组蛋白（2-261）和BMHSP60（262-572）的C末端（262-572）（262-572）两者之间的纽带以相同的方式进行了检查。结果，发现14E结合了BMHSP60的N末端部分而无需磷酸化。接下来，通过Western Broting检查了14E，14Z和BMHSP60在柔滑阶段的主要组织和5年幼虫时期的主要组织中的表达。据透露，在所有发生阶段的主要组织中，14E，14Z和BMHSP60均高度表达。 14-3-3是负责细胞信号传输的分子适配器。另一方面，HSP60是控制蛋白质折叠的分子伴侣。两者的键似乎在蚕细胞中蛋白质成熟和功能表达之间的协调中起着重要作用。该研究结果发布在神经科学研究（印刷）上。