アルツハイマー病分子病態の解明:カイコモデル系によるアプローチ

阐明阿尔茨海默病的分子病理学：利用蚕模型系统的方法

基本信息

批准号：
18890212
负责人：
天竺桂弘子
金额：
$ 1.68万
依托单位：
Meiji Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は,アルツハイマー病関連遺伝子カイコオルソログ,14-3-3epsion(14E),zeta(14Z)について機能解析を行った。はじめに,絹糸腺を二次元電気泳動で分離し,Xpress-tagged14-3-3plobeと反応するスポットについて解析したところ,カイコHeat Shock Protein 60(BmHSP60)であることが明らかとなった。HEK293細胞に14Eまたは,14ZとBmHSP60を共発現させ,免疫沈降法により,両者の結合を確認することができた。さらに,BmHSP60と14Eの結合部位を探索するために,BmHSP60のN末端部位(2-261)およびC末端部位(262-572)の組み換えタンパク質を作製し,同様の方法で両者の結合を検討した。その結果14Eは,BmHSP60のN末端部分とリン酸化非依存的に結合することが明らかとなった。次に,カイコ発生ステージおよび5齢幼虫期間の主要な組織における,14E,14Z,BmHSP60の発現をウエスタンブロティングで検討した。14E,14Z,BmHSP60ともに全発生ステージの主要な組織で高発現していることが明らかとなった。14-3-3は細胞シグナル伝達を担う分子アダプターである。一方Hsp60はタンパク質フォールディングを制御する分子シャペロンである。両者の結合は,カイコ細胞におけるタンパク質成熟と機能発現の連携に重要な役割を果たしていると思われた。この研究成果は,Neuroscience Researchに投稿した(印刷中)。

今年，对与阿尔茨海默氏病，14-3-3- epsion（14e）和Zeta（14z）有关的蚕直向直系同源物进行了功能分析。首先，通过二维电泳分离丝腺，并分析与Xpress标记的14-3-3-3plobe反应的斑点，并发现蚕热蛋白60（BMHSP60）。 HEK293细胞与14E或14Z和BMHSP60共表达，并通过免疫沉淀确认它们之间的结合。此外，还制备了BMHSP60的N末端位点（2-261）（2-261）和C末端位点（262-572）的重组蛋白（2-261）和BMHSP60的C-末端位点的重组蛋白的结合位点，并以类似方式研究了它们之间的结合。结果表明，14E以磷酸化非依赖性方式与BMHSP60的N末端部分结合。然后，通过蛋白质印迹检查了蚕发育阶段和第五龄幼虫期间主要组织中14E，14z和BMHSP60的表达。已经揭示了14E，14Z和BMHSP60在各个发育阶段都高度表达在主要组织中。 14-3-3是负责细胞信号传导的分子适配器。另一方面，HSP60是调节蛋白质折叠的分子伴侣。两者之间的结合似乎在蚕细胞中蛋白质成熟与功能表达之间的联系中起重要作用。这项研究发现已发布给神经科学研究（印刷中）。