シングルセル解析による歯根膜由来間葉系幹細胞の再生機構の解明

单细胞分析阐明牙周膜间充质干细胞的再生机制

基本信息

批准号：
20K09989
负责人：
妻沼有香
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09989/
关键词：
歯根膜由来間葉系幹細胞

项目摘要

本研究は、ヒト歯根膜由来間葉系幹細胞（MSC）のシングルセル解析を行うことで、これまで集団としてしか解析してこなかった細胞について、個々の細胞の特徴を把握し、その細胞の特徴を生かした再生医療への応用を目的としている。これまでヒト歯根膜由来MSCのシングルセル解析の報告はないため、シングルセル解析での細胞の不均一性、均一性を明らかとすること。また解析するのみにとどまらず、解析結果を用いることで、特異的な遺伝子発現が歯周組織の再生にどのように影響を与えるかを明らかにすることを目指している。シングルセル解析の具体的な方法としては、若年者の健常人から採取した抜去歯を用いてヒト歯根膜由来MSCを単離する。単離した異なるドナーで継代数の様々な細胞をシングルセル解析システムを用いて　50細胞から100細胞程度に単離する。この個々の細胞から抽出したRNAを用いてシングルセルRNAシーケンスを行う。今年度は、歯根膜由来MSCの採取のための、倫理審査のための準備や、シングルセル解析を行うための、手技の習得及び条件の検討を行った。特にシングルセル解析では、シングルセルにする際の細胞の状態が、結果に与える影響が大きいため、どのように細胞の準備を行うべきかについての検討を行った。今後最適な条件下で解析を行っていく予定であったが、研究代表者の兼務している他機関での業務の都合により、研究の継続が困難となったため、研究を中断することとなった。

在这项研究中，通过对人牙周膜来源的间充质干细胞（MSC）进行单细胞分析，我们将能够了解单个细胞的特征，而此前这些细胞仅作为群体进行分析，其目的是应用再生医学利用了这一点。由于目前还没有对人牙周膜来源的间充质干细胞进行单细胞分析的报道，我们的目的是阐明单细胞分析中细胞的异质性和同质性。此外，我们的目标不仅是分析，而且利用分析结果来阐明特定基因表达如何影响牙周组织再生。作为单细胞分析的一种具体方法，使用从年轻健康个体中采集的拔牙来分离人牙周膜来源的间充质干细胞。使用单细胞分析系统将来自不同分离供体的不同传代次数的细胞分离成大约50至100个细胞。单细胞 RNA 测序是使用从这些单个细胞中提取的 RNA 进行的。今年，我们准备了牙周膜间充质干细胞采集的伦理审查，并研究了单细胞分析的技术和条件。特别是在单细胞分析中，细胞制成单细胞时的状态对结果影响很大，因此我们研究了如何制备细胞。我们本来计划将来在最佳条件下进行分析，但由于主要研究者在其他机构的工作，继续研究变得困难，所以我们决定暂停研究。