発達期における不十分な味覚刺激が味覚伝導路形成に及ぼす影響

味觉刺激不足对发育过程中味觉通路形成的影响

• 批准号: 20K18292
• 负责人: 冨山 克俊
• 金额: $ 2.08万
• 依托单位: Dokkyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18292/
• 关键词: 味質; 大脳皮質味覚野; 神経細胞活動; イメージング; 味覚中枢; 味覚障害; リッキング; 神経可塑性; SNAP25; リッキングテスト; 味覚伝導路; 味覚感受性; 発達期; 生活習慣病

マウスの大脳皮質味覚野における味覚刺激時の誘発反応を領域イメージング法にて可視化する実験系を構築した。具体的には、二光子励起顕微鏡を用いた生体イメージングにより、味覚刺激物質投与時の大脳皮質一次味覚野活動を観察する。生体下においてマウスの神経細胞活動を観察するために、緑色カルシウム感受性蛍光タンパク質GFP-based Calcium Calmodulin probe(GCaMP: 細胞や生体分子を蛍光標識する緑色蛍光タンパク質であるGFPを遺伝子工学的に改変させた緑色蛍光Ca2+センサー)をコードする遺伝子をアデノ随伴ウイルスを用いて大脳皮質味覚野に注入し発現させる。このマウスに対し、すでに確立している大脳皮質生体内リアルタイムイメージング法と二光子励起顕微鏡を組み合わせ、神経の応答をCa2+の蛍光輝度の変化としてとらえ、覚醒下において大脳皮質味覚野における神経活動を可視化する実験系の構築を行った。味覚野はマウス側頭部に位置しているため、頭蓋窓を作製することが大変難しく、また顕微鏡下でin vivoで観察するための固定用チャンバーを接着することに難渋した。長期の繰り返しイメージングではなく、頭蓋窓を作製直後にイメージングを行う方法に変更した。また、味刺激は塩酸キニーネとスクロースのみを使用し、味覚誘発反応を取得することを目指していたが、味覚野には味覚マップが存在することが知られており、その他の味質においても同様に実験系を確立していく。ケージ内に真水・味添加水の2つのボトルを設置し、リック解析式二瓶嗜好実験システムを用いてマウスの各ボトルの飲水量を計測することに成功した。

构建了一个实验系统，以使用区域成像的小鼠脑皮质味皮层中的味觉刺激中可视化诱发的反应。具体而言，通过使用两光子激发显微镜的生物成像观察到脑皮质的主要味道皮质活性。 To observe neuronal activity in mice under living organism, a gene encoding the green calcium-sensitive fluorescent protein GFP-based Calcium Calmodulin probe (GCaMP: a green fluorescent Ca2+ sensor made by genetically engineering modification of GFP, a green fluorescent protein that fluorescently labels cells and biological molecules), is injected into the cerebral cortical taste cortex using an腺相关病毒。将该小鼠与已经建立的实时脑皮质成像方法和两光子激发显微镜结合使用，以将神经反应视为Ca2+荧光亮度的变化，并构建一个实验系统，以可视化在觉醒期间大脑皮质味皮层中的神经活动。由于味道皮质位于小鼠的时间部分，因此很难创建一个颅面窗口，并且很难将固定室连接到显微镜下的体内观察室。在创建颅窗后立即将方法更改为成像，而不是长期重复的成像。此外，目的是仅使用盐酸奎宁和蔗糖来刺激味道，并获得味道引起的反应，但众所周知，味道皮质中有一个味道图，并且还将在其他味道质量中建立实验系统。将两瓶淡水和风味味的水放在笼子中，并使用Rick Analivaly NIHEI偏好实验系统成功测量了每个小鼠瓶中的水量。

项目成果

亜鉛欠乏による味覚障害モデルマウス作製の試み

尝试建立因缺锌而导致味觉障碍的小鼠模型

• 发表时间: 2022
• 作者: 穐吉亮平;冨山克俊;栃木康佑;坂本光;岩崎昭充;田中康広
• 通讯作者: 田中康広