ＨＩＶによるＴ細胞機能不全を回復する抗ミリストイル基ダイアボディによる治療法開発

开发使用抗肉豆蔻酰基双抗体恢复 HIV 引起的 T 细胞功能障碍的治疗方法

基本信息

批准号：
20K07526
负责人：
林宣宏
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

“HIVはその遺伝子産物であるNefによって、本来は感染宿主細胞（Ｔ細胞）が使用している弱い相互作用に介在して効果的に細胞機能を停止している”、という申請者の研究に基づく仮説と、独自の抗体ライブラリー技術を用いて、NefがＴ細胞の機能を停止するのを阻止するダイアボディ(２重特異性抗体)を抗ミリストイル基抗体と抗Nef抗体を使って作製し、エイズ治療のための分子標的薬プロトタイプを開発する。令和４年度は、先に作成したダイアボディ(２重特異性抗体)の性能が低いことが分かったので、新たに前年度までに取得していた複数のクローンから、抗HIV-Nef抗体と、抗ミリストイル基抗体のそれぞれに関してより性能の高いものを選んだ（モノクローナル化）。本年度は、それらをリンカーで繋いでダイアボディ(２重特異性抗体)を作製し、改めてその性能を評価する。他方、抗体創薬で必要な、抗体への細胞移入能力を付与するために、ファージ粒子由来の細胞透過タンパク質を付与した新規機能性抗体を開発した。この機能部位を付与することで、接種されたダイアボディが標的細胞内に移入されて、病原分子の機能を阻害出来るようになる。昨年度は、この分子針を付与しても、抗体の機能が損なわれないことを確認した。今年度はその分子針を新たに作成したダイアボディに付与して、その細胞移入能を調べる。さらに、先に作成した、機能アッセイに使用する、抗原（HEV Nef）を発現しているJurkat細胞を用いて、今後は細胞へ分子針が付加された抗体を導入し、導入後に細胞内で抗原抗体反応を確認すると共に、病原体により失われた細胞機能（CD4のダウンレギュレーション）の回復を確認することが課題である。

根据申请人的研究，“HIV利用其基因产物Nef通过受感染宿主细胞（T细胞）通常使用的弱相互作用来有效地阻止细胞功能。基于这一假设并使用我们独特的抗体库技术，我们创建了一种双抗体（diabody）”。双特异性抗体）使用抗肉豆蔻酰基抗体和抗 Nef 抗体来阻止 Nef 停止 T 细胞功能，开发用于治疗艾滋病的分子靶向药物原型。 2020财年，我们发现之前创建的双抗体（双特异性抗体）的性能较低，因此我们从前一年获得的多个克隆中新开发了一种抗HIV-Nef抗体，具有更高性能的抗肉豆蔻酰基团抗体。被选择（单克隆化）。今年，我们将用连接子将它们连接起来，创建双抗体（双特异性抗体），并再次评估其性能。另一方面，为了赋予抗体转染细胞的能力（这是抗体药物发现所必需的），我们开发了一种新的功能性抗体，该抗体被赋予了源自噬菌体颗粒的细胞穿透蛋白。通过提供该功能位点，接种的双抗体可以被导入靶细胞并抑制致病分子的功能。去年，我们证实添加这种分子针不会损害抗体功能。今年，我们将把分子针连接到新创建的双抗体上，并检查其导入细胞的能力。此外，使用先前创建的表达用于功能测定的抗原（HEV Nef）的Jurkat细胞，我们将用分子针将抗体引入到细胞中，引入后抗原将被吸收到细胞中。确认抗体反应以及因病原体而丧失的细胞功能（CD4 下调）的恢复。