Characterization of neuron-like cells differentiated from human dental pulp stem cells

人牙髓干细胞分化的神经元样细胞的表征

基本信息

批准号：
21K10172
负责人：
白川哲夫
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

レット症候群女児および健常女児の歯髄由来の間葉系幹細胞（MSCs）について、市販の間葉系幹細胞専用培地を用いて培養したのち、Gene Query Human Cell Surface Markers qPCR Array Kit を用いて細胞表面抗原を検索した。そののち、健常女児の抜去歯より採取した歯髄組織について、3%グリオキサール溶液で固定後、凍結組織切片を作成した。CD69ならびにCD4、CD8、CD103のいずれかについて免疫蛍光二重染色を行い、共発現の有無を検討した。続いて低接着表面三次元培養プレートにて、健常女児歯髄由来MSCsを培養し、細胞の活性ならびに増殖能を調べた。Cell Surface Markers qPCR Array Kitにより、細胞表面抗原88種について、レット症候群女児由来のMSCsにおいて発現レベルの高い抗原を検索した。その結果、これまで歯髄由来MSCsで発現の報告のないCD69について、レット症候群女児由来MSCsのみに高い発現を確認した。そこでその制御機序を明らかにする目的でTNF-αによる刺激を行い、CD69の発現をリアルタイムPCR法で調べた。その結果、レット症候群女児および健常女児の歯髄由来MSCsでは、ともにTNF-α刺激によりCD69 mRNAが濃度依存的に増加することを確認した。また健常女児歯髄由来MSCsについての免疫蛍光二重染色で、CD69とCD4、CD8、CD103のいずれかが共発現している細胞の存在を確認したが、その数はわずかであった。続いて、歯髄由来MSCsを最長で7日間静置培養し、神経細胞への分化誘導の前段階としてスフェロイド形成を試みた。しかし培養開始後2日から3日で100から1000個程度の細胞塊の形成を認めたものの、その後増殖は停止し、7日後に細胞塊内部の細胞がアポトーシスを起こしていることを確認した。

使用市售的间充质干细胞专用培养基培养源自患有 Rett 综合征的女孩和健康女孩的牙髓的间充质干细胞 (MSC)，并使用 Gene Query Human Cell Surface Markers qPCR Array 检测细胞表面抗原我搜索过。此后，将从健康女孩拔除的牙齿中收集的牙髓组织固定在3％乙二醛溶液中，并制备冷冻组织切片。对 CD69 以及 CD4、CD8 和 CD103 中的任何一个进行免疫荧光双染色，以检查共表达的存在或不存在。接下来，将健康女性牙髓来源的间充质干细胞在低粘附性三维培养板上培养，并检查细胞活性和增殖能力。使用 Cell Surface Markers qPCR Array Kit，我们在 88 个细胞表面抗原中寻找来自患有 Rett 综合征的女孩的 MSC 中高表达水平的抗原。结果，我们证实CD69仅在来自患有Rett综合征的女孩的MSC中高表达，而CD69尚未被报道在牙髓来源的MSC中表达。因此，为了阐明调控机制，我们用TNF-α进行刺激，并使用实时PCR检测CD69的表达。结果，我们证实，当用 TNF-α 刺激时，来自患有 Rett 综合征的女孩和健康女孩的牙髓的 MSC 中 CD69 mRNA 以浓度依赖性方式增加。此外，对健康女童牙髓来源的间充质干细胞进行双重免疫荧光染色证实存在共表达CD69、CD4、CD8或CD103的细胞，但数量较少。接下来，将牙髓来源的 MSC 静态培养长达 7 天，并尝试形成球状体，作为诱导分化为神经细胞的初步步骤。然而，虽然在培养开始后2至3天观察到约100至1,000个细胞团的形成，但此后增殖停止，7天后，证实细胞团内的细胞发生凋亡。

项目成果

期刊论文数量（2）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

MECP2遺伝子変異を有するヒト歯髄幹細胞の特性解析

MECP2基因突变的人牙髓干细胞的表征

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
星まなみ;石山未紗;菊入　崇;長谷賢知;相馬久実;白川哲夫
通讯作者：
白川哲夫

Alteration of monoaminergic systems in the caudal medulla and its possible link to diurnal increase of apnea in a mouse model of Rett syndrome

雷特综合征小鼠模型中尾髓质单胺能系统的改变及其与呼吸暂停昼间增加的可能联系

DOI：
10.2334/josnusd.22-0474
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
1.9
作者：
Hoshi Manami;Ishiyama Misa;Wada Takashi;Hase Kenchi;Itoh Masayuki;Kikuiri Takashi;Shirakawa Tetsuo
通讯作者：
Shirakawa Tetsuo

Alteration of monoaminergic systems in the caudal medulla and its possible link to diurnal increase of apnea in a mouse model of Rett syndrome

雷特综合征小鼠模型中尾髓质单胺能系统的改变及其与呼吸暂停昼间增加的可能联系

DOI：
10.2334/josnusd.22-0474
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
1.9
作者：
Hoshi Manami;Ishiyama Misa;Wada Takashi;Hase Kenchi;Itoh Masayuki;Kikuiri Takashi;Shirakawa Tetsuo
通讯作者：
Shirakawa Tetsuo

MECP2遺伝子変異を有するヒト歯髄幹細胞の特性解析

MECP2基因突变的人牙髓干细胞的表征