難治性皮膚潰瘍におけるCD271陽性幹細胞の病態解明と革新的治療法の開発

阐明难治性皮肤溃疡中 CD271 阳性干细胞的病理学并开发创新疗法

基本信息

批准号：
21K08360
负责人：
岩田洋平
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08360/
关键词：
CD271

项目摘要

今回の研究は、CD271ノックアウトマウスを用いた創傷治癒モデルの実施と解析である。そのため、2022年度は、昨年度に受精卵から個体化したCD271ノックアウトマウスの繁殖を行った。当初、個体化したノックアウトマウス同士のペアで繁殖を試みたが、十分な数のマウスが出生・発育せず繁殖が出来なかった。そのため、解決策として、ホモ変異のCD271ノックアウトマウスと野生型マウスをペアリングして、ヘテロ変異型のCD271ノックアウトマウスを作成することで繁殖を試みる事とした。野生型とホモ変異マウスのペアリングでは、無事にマウスが出生・発育し繁殖に成功した。出生したマウスの尾よりDNAを採取しPCR法を用いてジェノタイピングを行い、出生マウスがヘテロ変異であることを確認後、ヘテロ変異のマウス同士でペアリングした。ヘテロ変異マウス同士のペアからは、野生型マウス、ヘテロ変異を有するCD271ノックアウトマウス、ホモ変異を有するCD271ノックアウトマウスが出生する可能性があるため、出生したマウスを4週齢の時点で全てジェノタイピングし、スクリーニングを行った。スクリーニングにて、ホモ変異を有するCD271ノックアウトマウスが出生し成育していることが確認された。ホモ変異を有するCD271ノックアウトマウスが生殖可能な週齢まで成育させ、複数の繁殖ペアを作成した。現在ホモ変異を有するCD271ノックアウトマウスの繁殖ペアより出生したマウスの発育を進行中である。

本研究涉及使用 CD271 敲除小鼠进行伤口愈合模型的实施和分析。因此，在2022年，我们培育出了去年由受精卵发育而来的CD271基因敲除小鼠。最初，尝试用一对个体化基因敲除小鼠进行繁殖，但有足够数量的小鼠没有生育和发育，因此无法繁殖。因此，作为解决方案，我们决定尝试通过将纯合CD271敲除小鼠与野生型小鼠配对来培育杂合CD271敲除小鼠。当野生型和纯合突变小鼠配对后，小鼠成功出生、发育并成功繁殖。从新生小鼠尾部采集DNA，采用PCR方法进行基因分型，确认小鼠出生时携带杂合突变，将杂合小鼠进行配对。一对杂合突变小鼠可能产生野生型小鼠、杂合突变的CD271敲除小鼠和纯合突变的CD271敲除小鼠，因此所有出生的小鼠在4周龄时进行基因分型并进行筛选。通过筛选，证实纯合突变的CD271基因敲除小鼠已出生并生长。将具有纯合突变的 CD271 敲除小鼠培养至生育年龄，并产生多个繁殖对。我们目前正在开发由一对具有纯合突变的 CD271 敲除小鼠繁殖而成的小鼠。