歯周病原因菌の病原性因子及び挿入配列を制御するsmall RNAの解析

控制牙周病致病菌毒力因子和插入序列的小RNA分析

基本信息

批准号：
20K09922
负责人：
大貝悠一
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09922/
关键词：
歯周病原因菌 sRNA small RNA 挿入配列

项目摘要

Aggregatibacter actinomycetemcomitansのsmall RNA発現性の解析を目的とし、RNAシャペロンのひとつでありsRNAを介した発現制御に関与するhfqの欠損株、外環境の刺激に応答し各種遺伝子やsRNAの制御を担う２成分制御系の欠損株の解析を行った。一部の２成分制御系因子の欠損株においてはヒト培養細胞への付着性、酸化ストレスに対する抵抗性に変化が認められたため、現在詳細なメカニズムの検討中である。下流遺伝子の解析においては二次元電気泳動法により酸化ストレスに変動を示す２成分制御系欠損株１株においてTCA回路で働く因子のタンパク発現量の増加を認めた。同欠損株を用いたRNAseq解析においては嫌気呼吸関連因子や酸化ストレス関連因子の発現変動を複数認めた。これら個別の因子とTCSの関連を現在検討中である。hfq欠損株は二次元電気泳動で複数の著明な発現変動を示すタンパクが見られる。RNAseq解析においては外膜タンパクの一種であるオートトランスポーターなど病原性との関連が示唆されている因子の発現変動を確認した。これらの発現制御に関与するsRNAの探索を今後行う予定である。Fusobacteirum nucleatumは歯周病原因菌の一つである。本菌は他細菌と結合する（共凝集）ことにより、口腔内のプラーク成熟に重要な役割を持つと考えられている。当研究では本菌にも着目し、Hfqタンパクやその他２成分制御系などのレギュレーターの遺伝子欠損株の解析から既報のF. nucleatum sRNAの発現性などを解析する予定である。

本研究的目的是分析 Aggregatibacter actinomycetemcomitans 中的小 RNA 表达，包括缺乏 hfq 的菌株，hfq 是 RNA 伴侣之一，参与 sRNA 介导的表达控制，以及负责调节各种基因和 sRNA 响应的两个组件我们分析了缺乏调节系统的菌株。在缺乏某些二元调节系统因子的菌株中，观察到了对人类培养细胞的粘附和对氧化应激的抵抗力的变化，目前正在研究详细机制。在下游基因分析中，二维电泳显示，在缺乏二元调控系统（显示氧化应激波动）的菌株中，TCA 循环中起作用的因子的蛋白质表达水平有所增加。使用相同缺失菌株的RNAseq分析揭示了多种无氧呼吸相关因子和氧化应激相关因子表达的变化。我们目前正在研究这些个体因素与 TCS 之间的关系。在 hfq 缺陷菌株中，二维电泳显示多种蛋白质表现出显着的表达变化。 RNAseq 分析证实了与致病性相关的因子表达的变化，例如自转运蛋白，它是一种外膜蛋白。我们计划在未来寻找参与调节这些表达的 sRNA。具核梭杆菌是引起牙周病的细菌之一。人们认为这种细菌通过与其他细菌结合（共聚集）在口腔菌斑成熟中发挥重要作用。在这项研究中，我们也将重点关注这种细菌，并计划分析Hfq蛋白和其他二元调控系统等调节因子的基因缺陷菌株，以及先前报道的具核梭菌sRNA的表达。