A replicon-based screen of yellow fever virus host factors: Toward generation of highly productive virus-producer cell lines

基于复制子的黄热病病毒宿主因子筛选：旨在产生高产病毒生产细胞系

• 批准号: 21K06571
• 负责人: 齊藤 恭子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06571/
• 关键词: 黄熱ウイルス; レプリコン; 複製; 宿主因子; ゲノムワイドスクリーニング; ワクチン産生細胞; スクリーニング; 細胞改変

代表者はこれまでに、黄熱ウイルス（YFV）17D株のRNA複製能をレポーター発現で評価できるサブゲノミックレプリコンを構築している。本研究では、当該レプリコンを用いて、①YFVの複製に関与する宿主因子を見出すことにより、YFV17D高生産性Vero細胞を作出すること、②YFVのゲノム複製機構の手がかりを得ることを目的としている。これまでにYFV17Dのサブゲノミックレプリコンが持続的に複製されるVero細胞（レプリコン細胞）を樹立し、今年度はその性状解析に関する論文を発表した。レプリコンは構造遺伝子の代わりにGFP融合ゼオシン耐性遺伝子をコードしているので、レプリコンの複製をGFP蛍光でモニターすることができる。Vero細胞以外にヒト肝がん由来Huh7.5.1-8細胞でも同様のレプリコン細胞を作製し、特性解析を行ったところ、当該レプリコン細胞はVeroレプリコン細胞よりも抗ウイルス薬剤に対する感受性が高く、抗ウイルス薬物スクリーニングに有用であることがわかった。またヒト由来という点は遺伝学的スクリーニングにもメリットがあり、今後はVeroとHuh7.5.1-8の2種のレプリコン細胞を補完的に使用していくのが良いと考えられた。また、YFV感染がもたらす細胞内構造変化をアポダイズド位相差・蛍光顕微鏡で解析したところ、感染に特徴的なオルガネラ膜の時間変化を捉えることができた。今後、複製に関わる膜構造の形成因子を解析する際には、当該顕微鏡を用いたイメージングが有用であると考えられた。

该代表目前已经构建了一个亚基因组复制子，可以通过表达报告基因来评估黄热病病毒（YFV）17D株的RNA复制能力。在本研究中，我们的目标是利用该复制子（1）通过发现参与YFV复制的宿主因子来产生YFV17D高产Vero细胞，以及（2）获得有关YFV基因组复制机制的线索。到目前为止，我们已经建立了Vero细胞（复制子细胞），其中YFV17D的亚基因组复制子不断复制，今年我们发表了一篇关于其表征的论文。由于复制子编码 GFP 融合的博莱霉素抗性基因而不是结构基因，因此可以通过 GFP 荧光监测复制子的复制。除了Vero细胞之外，还使用人肝癌来源的Huh7.5.1-8细胞产生了类似的复制子细胞，并分析了它们的特性，发现这对于药物筛选是有用的。此外，源自人类的事实在基因筛选方面具有优势，将来以互补的方式使用两种类型的复制子细胞Vero和Huh7.5.1-8将是一个好主意。此外，当我们使用变迹相差/荧光显微镜分析 YFV 感染引起的细胞内结构变化时，我们能够捕获作为感染特征的细胞器膜的时间变化。将来，在分析复制涉及的膜结构的形成因素时，使用这种显微镜进行成像将很有用。

项目成果

黄熱ウイルスサブゲノミックレプリコンを持続的に保持するVero細胞の樹立

建立持久保留黄热病病毒亚基因组复制子的 Vero 细胞

黄熱ウイルス17D株サブゲノミックレプリコンを持続的に保持するVero細胞の特性解析

持续保留黄热病病毒 17D 株亚基因组复制子的 Vero 细胞的表征

• 发表时间: 2022
• 作者: 齊藤恭子;島﨑健太朗;深澤征義;鈴木亮介;中村（桶本）優子;加藤薫;高崎智彦;花田賢太郎
• 通讯作者: 花田賢太郎

Vero細胞における黄熱ウイルス17D株サブゲノミックレプリコンの持続的な複製の性状解析

黄热病病毒株 17D 亚基因组复制子在 Vero 细胞中持续复制的表征

• 发表时间: 2021
• 作者: 齊藤恭子;深澤征義;鈴木亮介;高崎智彦;花田賢太郎
• 通讯作者: 花田賢太郎

Establishment of Vero cell lines persistently harboring a yellow fever virus 17D subgenomic replicon

建立持续携带黄热病病毒 17D 亚基因组复制子的 Vero 细胞系

• DOI: 10.1016/j.virusres.2022.198935
• 发表时间: 2022
• 影响因子: 5
• 作者: Kyoko Saito; Kentaro Shimasaki; Masayoshi Fukasawa; Ryosuke Suzuki; Yuko Okemoto
• 通讯作者: Yuko Okemoto

Establishment of Vero cell lines persistently harboring a yellow fever virus 17D subgenomic replicon

建立持续携带黄热病病毒 17D 亚基因组复制子的 Vero 细胞系

• DOI: 10.1016/j.virusres.2022.198935
• 发表时间: 2022
• 影响因子: 5
• 作者: Kyoko Saito; Kentaro Shimasaki; Masayoshi Fukasawa; Ryosuke Suzuki; Yuko Okemoto
• 通讯作者: Yuko Okemoto