HCVの新規生活環再現システムの開発とそれを用いた抗HCV剤の評価・探索

新型HCV生命周期繁殖系统的开发及其抗HCV药物的评价与探索

基本信息

批准号：
09J08756
负责人：
森京子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

当該年度は、2つの大きな成果をあげ、本研究の最終目標を達成することができた。1つ目は、急性肝炎患者由来AH1株(遺伝子型1b)の全長HCVRNAの上流にレポーター遺伝子であるレニラルシフェラーゼを組み込むことにより、簡便に薬剤アッセイができるシステム(AH1R)の構築に成功した。このアッセイシステムを国際誌(Virus Genes)に投稿して、受理された(Mori K et al.,Virus Genes,2012)。AH1RとOR6(遺伝子型1bHCV-0株由来のアッセイシステム)を用いて、IFN-α、IFN-γおよびサイクロスポリンAの薬剤感受性を比較したところ、AH1株由来の全長HCVRNA複製システム(AH1細胞)とHCV-0株由来の全長HCVRNA複製システム(0細胞)を比較した以前の結果と同じ結果を示したことから、これらの薬剤に対する感受性の違いは、ウイルス側の要因で決まっていることが示唆された。2つ目の成果は、本研究の最終目標であった「新しいLi23細胞を用いた、HCV生活環の再現システムの構築」を達成したことである。治癒細胞であるORL8cを用いて、感染性粒子産生系JFH-1(遺伝子型2a)の感染が認められ、さらに、ORL8cから産生されたJFH-1粒子がさらにORL8cに感染性を示すことを見出した。この結果により、既存のHuH-7細胞と異なる新しいLi23細胞におけるHCV生活環が完成したことになる。HCV生活環の再現システムを2種類の細胞で構築したことは、「HCVの感染経路の研究」および「HCVに関連する宿主因子の研究」などに広く応用でき、HCV研究においてとても意義のある成果である。

这一年，我们取得了两大成果，实现了本研究的最终目标。首先，通过将报告基因海肾荧光素酶整合到源自急性肝炎患者的AH1株（基因型1b）的全长HCV RNA上游，我们成功构建了一个可以轻松进行药物测定的系统（AH1R）。该检测系统已提交给国际期刊（Virus Genes）并被接受（Mori K et al., Virus Genes, 2012）。我们使用 AH1R 和 OR6（源自基因型 1b HCV-0 株的检测系统）比较了 IFN-α、IFN-γ 和环孢菌素 A 的药物敏感性，发现源自 AH1 株的全长 HCV RNA 复制系统（一个结果与先前比较源自HCV-0株(H1细胞)的全长HCV RNA复制系统和源自HCV-0株(0细胞)的全长HCV RNA复制系统的结果相同，表明有人认为，对这些药物的敏感性差异是由病毒方面的因素决定的。第二个成果是实现了本研究的最终目标，“构建使用新的 Li23 细胞再现 HCV 生命周期的系统。”使用愈合细胞ORL8c，观察到感染性粒子产生系统JFH-1(基因型2a)的感染，此外，发现由ORL8c产生的JFH-1粒子对ORL8c具有感染性。这一结果表明，与现有HuH-7细胞不同，新Li23细胞中的HCV生命周期已经完成。利用两种细胞再现HCV生命周期的系统的构建可广泛应用于“HCV感染途径的研究”和“HCV相关宿主因素的研究”，是HCV研究中非常重要的成果。是。