Role of membrane lipid-modulated signal transductions in endotoxin hyperresponse of fatty livers

膜脂调节信号转导在脂肪肝内毒素高反应中的作用

基本信息

批准号：
20K07349
负责人：
Qin XianYang
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K07349/
关键词：
非アルコール性脂肪性肝炎脂肪肝トランスグルタミナーゼエンドトキシン微小環境マルチオミクス解析ホスファチジルエタノールアミン LIMK1 in situイメージング NASH 膜脂質膜タンパク質

项目摘要

本研究では、脂肪肝の微小環境において細菌性エンドトキシン（LPS）誘発性炎症反応並びに非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）の発症において分子間接着因子トランスグルタミナーゼ（TG2）の役割の解明を目的とする。本年度は、１）NASH病態STAMマウスと高濃度LPS誘発性炎症マウスにおいて、TG2は肝組織中CD80＋F4/80＋M1型マクロファージに特異的に活性化されることを見出した。RNA-seq解析を用いて、クロドロン酸内包リポソーム投与によりマクロファージ排除したマウスとTG2阻害剤シスタミン（CTM）投与マウスにおいて、LPS刺激による肝組織中の遺伝子発現変化を比較し、LPS刺激に対する同様な炎症抑制効果を示した。2）ヒト肝がん細胞JHH7とマウスマクロファージ細胞 Raw264.7を用いて、ホスファチジルエタノールアミン（PE）処理によるLPS応答性への影響を検証した。IL-6遺伝子発現はPEの前処理によりLPS刺激に対する反応性が有意に増加した。3）Raw264.7細胞を用いてLPS刺激とTG2活性化の関連性を検証した。Raw264.7細胞においてLPS処理によりTG2の架橋酵素活性と遺伝子・タンパク質発現が有意に増加した。CTMは、LPSによるIL-6やTNFα遺伝子発現の上昇やマクロファージの細胞死が有意に抑制した。さらに、LPSで刺激したマクロファージの培地から得られた上清を用いて、条件培地（CM）を作成した。このCMは正常肝細胞HcのIL-6遺伝子を強く誘導したが、CTM添加により有意に抑制された。これらの結果から、TG2はLPS-TLRシグナルカスケードだけでなく、LPS刺激による分泌されるサイトカインやその下流受容体シグナルカスケード、そして炎症微小環境においてマクロファージと肝細胞との細胞間相互作用にも関与していることが示唆された。

这项研究旨在阐明分子间粘附因子转谷氨酰胺酶（TG2）在细菌内毒素（LPS）诱导的炎症反应和非酒精性脂肪性肝炎（NASH）在脂肪肝微环境中的作用。今年，我们发现1）TG2在NASH病理Stam小鼠和高浓度LPS诱导的炎性小鼠的NASH病理Stam小鼠和炎性小鼠中特异性激活。使用RNA-Seq分析，我们比较了由LPS刺激引起的基因表达变化小鼠引起的肝脏组织，这些小鼠是由巨噬细胞通过氯膦酸盐封闭的脂质体给药和对TG2抑制剂西2M（CTM）施用的小鼠的巨噬细胞的，并显示出对LPS刺激的相似抑制作用。 2）使用人肝癌细胞JHH7和小鼠巨噬细胞RAW264.7用于验证磷脂酰乙醇胺（PE）处理对LPS反应性的影响。 IL-6基因表达显着增加了对PE预处理后对LPS刺激的反应性。 3）使用RAW264.7细胞验证了LPS刺激与TG2激活之间的关联。 LPS处理显着提高了RAW264.7细胞中TG2的交联酶活性以及基因和蛋白质表达。 CTM显着抑制了由于LPS和巨噬细胞的细胞死亡而导致的IL-6和TNFα基因表达的升高。此外，使用从LPS刺激的巨噬细胞介质获得的上清液制备条件培养基（CM）。该CM强烈诱导正常肝细胞HC的IL-6基因，但通过添加CTM显着抑制。这些结果表明，TG2不仅参与了LPS-TLR信号级联反应，还参与了LPS刺激的细胞因子及其下游受体信号级联反应，以及巨噬细胞与炎症微环境中巨噬细胞与肝细胞之间的细胞细胞相互作用。

项目成果

期刊论文数量（19）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

分子間接着因子活性化のin vivoイメージングによるエンドトキシン刺激肝臓の微小環境解析

通过分子间粘附因子激活的体内成像分析内毒素刺激的肝脏微环境

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
秦咸陽;古谷裕
通讯作者：
古谷裕

トランスグルタミナーゼ2を標的とする肝がん幹細胞の増殖制御と分子機構解明

靶向转谷氨酰胺酶2的肝癌干细胞生长调控及分子机制阐明

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Shiraishi Yasuyuki;Kimura Atsushi;Kimura Hiroaki;Ohmori Tsukasa;Takahashi Masafumi;Takeshita Katsushi;秦咸陽，小嶋聡一
通讯作者：
秦咸陽，小嶋聡一

Integrative Approaches of Bioassay and Computational Analysis for Discovering Potential Bioactive Compounds and Predictive Toxicity

用于发现潜在生物活性化合物和预测毒性的生物测定和计算分析的综合方法