B型肝炎ウイルスの肝細胞侵入・増殖機構の構造基盤と立体構造に基づく創薬

基于乙型肝炎病毒肝细胞侵袭增殖机制的结构基础和三维结构的药物发现

基本信息

批准号：
21K06494
负责人：
横川真梨子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、B型肝炎ウイルス（HBV）が肝細胞に侵入する際に必須のpreS1とNTCPの相互作用、およびHBVの増殖時に必要なpreSとキャプシド（Cp）の相互作用を原子分解能で明らかにすることでHBVの肝細胞侵入・増殖のメカニズムを解明すること、さらに明らかにした相互作用様式に基づき、その相互作用を阻害する化合物を抗HBV薬候補化合物として提唱することを目的としている。2022年度は、preS1に結合してNTCPとの相互作用を阻害することが報告されているカテキン二量体であるoolonghomobisflavan C (OHBF-C) とpreS1との相互作用を原子レベルで明らかにすることを目指した。10^-6 MのpreS1溶液に1当量のOHBF-Cを添加すると沈殿が生じ、沈殿にはpreS1とOHBF-Cが含まれていたことから、preS1とOHBF-Cが直接結合することを確認した。また、等温滴定型カロリメトリーより、preS1には複数分子のOHBF-Cが結合することが分かった。さらに、preS1上のOHBF-C結合部位を絞り込むため、preS1を5分割した部分ペプチドを調製し、各ペプチドとOHBF-Cの相互作用を溶液NMR法により調べた。その結果、OHBF-Cは全ての部分ペプチドと結合し、Proを含む疎水性残基と相互作用することが分かった。一方で、OHBF-Cの部分構造であるepigallocatechin gallate (EGCG) では、部分ペプチドとの相互作用がOHBF-Cに比べて著しく減弱していた。OHBF-CはEGCGが2個連結した構造を有することから、OHBF-CとPreS1は互いに多価で結合することが強く示唆された。

在这项研究中，我们以原子分辨率揭示了 preS1 和 NTCP 之间的相互作用，这对于乙型肝炎病毒 (HBV) 侵入肝细胞至关重要，以及 preS 和衣壳 (Cp) 之间的相互作用，这是 HBV 增殖所必需的。因此，我们的目的是阐明乙型肝炎病毒侵入和增殖到肝细胞的机制，并基于阐明的相互作用模式，提出抑制这种相互作用的化合物作为候选抗乙型肝炎药物化合物。 2022 年，我们将在原子水平上阐明 preS1 和乌龙同黄烷 C (OHBF-C) 之间的相互作用，据报道，它是一种儿茶素二聚体，可与 preS1 结合并抑制其与 NTCP 的相互作用。当将 1 当量的 OHBF-C 添加到 10^-6 M preS1 溶液中时，形成沉淀，并且沉淀中含有 preS1 和 OHBF-C，证实 preS1 和 OHBF-C 直接结合。此外，等温滴定量热法显示多个 OHBF-C 分子与 preS1 结合。此外，为了缩小preS1上的OHBF-C结合位点，将preS1分成五部分制备部分肽，并使用溶液NMR研究每个肽与OHBF-C之间的相互作用。结果发现，OHBF-C与所有部分肽结合，并与包括Pro在内的疏水性残基相互作用。另一方面，与OHBF-C相比，与OHBF-C的部分结构表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的部分肽的相互作用显着减弱。由于OHBF-C具有两个EGCG连接的结构，因此强烈表明OHBF-C和PreS1以多价方式彼此结合。