A novel regulatory mechanism of the function of tumor suppressor p27 by a nucleolar protein NPM1.

核仁蛋白 NPM1 调节肿瘤抑制因子 p27 功能的新机制。

基本信息

批准号：
21K05510
负责人：
千葉櫻拓
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

NPM1によるp27機能抑圧機構：前年度にNPM1のp27相互作用部位として３箇所のアミノ酸残基が示唆されたため、当該箇所の置換変異体とp27との動物細胞内相互作用を免疫沈降法により解析した結果、内在性NPM1発現下では外来性NPM1-p27相互作用が検出されず、内在性NPM1発現抑制下で変異体の相互作用低下が示された。NPM1は細胞内の液-液相分離に関与することから、p27との相互作用も液-液相分離を介しており、細胞破砕液中では検出されにくいと考えられた。また、NPM1抑制因子ARFとp27機能との相関性を検証するため、ARF遺伝子の破壊および外来性導入を試みたが、前者はARF遺伝子領域の別遺伝子との重複、後者はARFの増殖抑制機能のため実現困難であった。p53によるp27安定化機構およびp27発現とがん細胞表現型との相関性：前年度より、p53欠損によるp27タンパク質分解の促進、足場非依存条件下でのp53依存的なp27によるがん細胞増殖抑制が示唆されたため、p27の新規制御機構として重要と考え、積極的に研究を推進した。まず、p53はp27のポリユビキチン化非依存・プロテアソーム依存的分解を抑制することが示唆された。次に、p27の10番目セリン残基（S10）または187番目スレオニン残基（T187）の非リン酸化型変異により、p53欠損下でのp27分解が抑圧された。S10およびT187のリン酸化は各々異なるポリユビキチン化経路を誘導するが、p53に抑制されるp27分解系はこれらと同じシグナルに依存する未知の機構であることが示唆された。p27とがん細胞表現型の相関については、創傷治癒アッセイにより遊走能を、トランスウェルアッセイにより浸潤能を検証した結果、両表現型ともp27の誘導発現により抑制された。また、マウスがん異種移植系においてp27の誘導発現により転移が抑制された。

NPM1的p27功能抑制机制：在上一年，提出了三个氨基酸残基作为NPM1的P27相互作用，因此通过免疫量化方法分析了动物细胞之间的动物细胞之间的相互作用，在内部NPM1的表达下未检测到外国NPM1-P27的相互作用，并且在抑制内部NPM1表达的抑制下显示了突变体的相互作用。由于NPM1参与细胞中液态液相的分离，因此与p27的相互作用也通过液态液相的分离，被认为很难在细胞压碎溶液中检测到。此外，我们试图破坏和引入外来基因，以验证NPM1抑制因子ARF和P27功能之间的相关性，但前者在ARF基因区域中用单独的基因重复，而后者是ARF增殖抑制功能。因此，很难意识到。根据p53稳定机制和p27表达和癌细胞表达类型：从上一年开始，由于p53缺陷引起的p27蛋白分解，由于抑制的建议，在非辅助条件下，由于p53依赖性p27引起的癌细胞生长，他认为作为p27的新控制机制，这一点很重要，并积极促进研究。首先，有人建议p53抑制了基于多比基蛋白的非依赖性和原生的 - 依赖性分解。接下来，在p53缺陷下，p27拆卸中抑制了第10丝氨酸残基（S10）或第187螺纹残基（T187）的非磷酸化突变。 S10和T187磷酸化诱导了不同的多晶蛋白途径，但建议由p53抑制的p27分解系统是一种取决于同一信号的未知机制。关于p27与癌细胞表达类型之间的相关性，通过伤口愈合测定法验证了娱乐能力，而跨道是变压器，并且两种表达都被p27的诱导表达抑制。另外，在小鼠致癌移植系统中抑制了p27的转移。