Structural analysis of cFLIP as an iron-binding protein and elucidation of a new physiological function

cFLIP 作为铁结合蛋白的结构分析和新生理功能的阐明

• 批准号: 21K05380
• 负责人: 酒巻 和弘
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05380/
• 关键词: 鉄結合タンパク質; Fenton反応; 鉄硫黄タンパク質; フェロプトーシス; 分子進化; 偽プロテアーゼ

本年度は、大腸菌よりcFLIPのリコンビナント-タンパク質の精製と、リコンビナントを使った生化学的解析を中心に進めた。初段階から単一タンパク質としての精製は困難であることが判明したため、MBPとの融合タンパク質として改良を施すことで結果として精製が可能となった。精製したリコンビナントを使ってFenton反応への抑制効果の有無を調べたところ、抑制作用が認められた。また、cFLIPを発現する大腸菌は、コントロールの細胞に比べて過酸化水素水に対して耐性を示すことが明らかとなった。一方、システイン残基(Cys259)をアラニンに置換したcFLIP変異体を発現する大腸菌の場合は、耐性を失うことも認めた。

今年，我们从大肠杆菌中进行了CFLIP重组蛋白纯化，并使用重组分析进行了生化分析。从第一阶段开始，很难发现纯化为单个蛋白质，因此可以通过将其作为MBP融合蛋白改进来进行完善。使用精制的重组，对芬顿反应产生抑制作用，观察到抑制作用。很明显，表达CFLIP的大肠杆菌比对照细胞更耐氧化氢。另一方面，表达的CFLIP突变体的大肠杆菌还被丙氨酸取代的CFLIP突变体（Cys259），也已被发现正在失去抗性。