Funktionelle und strukturelle Charakterisierung des UbiX Flavoproteins von Escherichia coli

大肠杆菌 UbiX 黄素蛋白的功能和结构表征

• 批准号: 28525154
• 负责人: Privatdozent Dr. Thomas Kupke
• 金额: --
• 依托单位: Zentrum für Molekulare Biologie (ZMBH)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Fellowships
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2005-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/28525154?language=en
• 关键词: Funktionelle; und; strukturelle; Charakterisierung; des

Im Rahmen des Forschungsstipendiums soll das Flavoprotein UbiX aus Escherichia coli funktioneil und strukturell charakterisiert werden. UbiX wurde als rosanes Fusionsprotein gereinigt und Denaturierung dieses Fusionsproteins durch Säurebehandlung ermöglichte die Ablösung, anschliessende Reinigung und massenspektrometrische Analyse von an UbiX gebundenen Substanzen. So konnte gezeigt werden, dass eine der gebundenen Substanzen der Kofaktor Flavinmononukleotid ist. Bei den anderen Substanzen handelte es sich teils um rosane, teils um grün-blaue Addukte von Flavinmononukleotid mit niedermolekularen Verbindungen, die in den meisten Fällen fünf C-Atome hatten; eine dieser Verbindungen besitzt z. B. die Summenformel C5H8. Dies legt eine Verbindung von UbiX mit dem Isopentenyldiphosphat-Stoffwechsel (und damit dem Isoprenoid-Stoffwechsel) nahe. Allerdings ist UbiX (wie auch das putative Isoenzym UbiD) als 3-Octaprenyl-4-hydroxybenzoat-Decarboxylase annotiert worden und soll damit an der Ubiquinon-Biosynthese beteiligt sein. Diese Reaktion wurde aber bisher nicht in-vitro mit rekombinantem Protein gezeigt. Das Ziel des Forschungsvorhabens ist es, herauszufinden, welche Reaktion UbiX katalysiert, welcher Mechanismus dieser Reaktion zugrunde liegt, welche Aminosäurereste von UbiX das aktive Zentrum des Enzyms bilden und wie es zur Bildung der kovalenten Flavin-Addukte kommt.

我的研究建议是关于大肠杆菌黄素蛋白 UbiX 的功能和结构特征。对 UbiX 基础内容进行重新设计和大规模测量分析。 grün-blaue Addukte von Flavinmononukleotid mit niedermolekularen Verbindungen，死在 den meisten Fällen fünf C-Atome hatten；异戊烯基二磷酸酯-Stoffwechsel（以及类异戊二烯-Stoffwechsel）nahe。与蛋白质重组相关的体外反应。 Zentrum des Enzyms bilden und wie es zur Bildung der kovalenten Flavin-Addukte kommt.