IL-6/Stat3通路下调口腔扁平苔藓CD4+CD25+Treg功能及机制研究

Oral lichen planus is a T cell-mediated autoimmune disease, CD4+CD25+ regulatory T cells plays a critical role in the maintenance of immune homeostasis and prevention of autoimmunity. Past studies have demonstrated that the proportion of CD4+CD25+ T cells in OLP patients was significant higher than that in healthy controls, and the inhibition function of CD4+CD25+T cells cells to CD4+CD25- T cells proliferation was impaired. Nevertheless, the specific mechanism and how the impaired immunomodulation of CD4+CD25+ Treg cells contributes to the OLP pathogenesis remains largely unknown. IL-6 in OLP patients serum was significantly higher than healthy controls, and the existing research confirmed that IL-6/Stat3 contributes to impaired function of regulatory T cell.In this study, we intend to utlize flow cytometry and ELISA, RT-PCR, magnetic bead separation, cell coculture, molecular biology techniques to explore whether there is intrinsic defect or secondary dysfunction of CD4+CD25+regulatory T cells in the following aspects: (1) The number of CD4 + CD25 + T cells in peripheral blood and phenotype; (2) OLP CD4 + CD25 + T cells in vitro inhibitory function; (3) Related cytokines in serum and cell culture supernatant level; (4) IL-6 involved CD4 + CD25 + T cells in vitro inhibitory function; (5) IL-6-mediated phosphorylation of Stat3 in T cells.

口腔扁平苔藓是一种T细胞介导的自身免疫性疾病，CD4+CD25+调节性T细胞在机体免疫稳态的维持中发挥了重要作用。以往研究证明，OLP患者中该群细胞比例增高，且对效应T细胞增殖的抑制作用显著降低，然而其具体机制尚未阐明。IL-6/Stat3可参与下调Treg的功能，且已有研究证实OLP患者中IL-6较正常对照显著增高。本研究拟采用流式细胞术、ELISA，RT-PCR、磁珠分选、细胞共培养，分子生物学技术和方法就OLP患者Treg调节功能下降的机制进行以下研究：①OLP患者Treg的数量和表型，T细胞IL-6R的表达；②OLP患者Treg的体外抑制功能；③OLP血清和细胞培养上清中相关细胞因子水平；④IL-6对OLP患者Treg体外抑制功能的影响和机制；⑤IL-6对T细胞转录因子Stat3磷酸化的影响。

口腔扁平苔藓（oral lichen planus，OLP）是本专科常见的慢性免疫相关性疾病，且目前临床缺乏根本有效的治疗方法。近年来研究发现，调节性T细胞（regulatory T cells, Treg）细胞功能异常可能是OLP重要发病机制之一。本项目实验结果显示：OLP患者外周血中Treg数量占比升高且Foxp3表达增加，但患者Treg的功能存在受损：抑制性细胞因子TGF-β的转录和分泌均减少，其对效应T细胞增殖的抑制能力较健康人明显下降。本项目进一步深入到功能研究，以寻找OLP患者Treg细胞功能受损的原因。首先，通过ELISA方法发现，与健康对照人群比较，OLP患者唾液中IL-6的含量与OLP疾病严重程度存在明显正相关，且外周血IL-6含量升高；其次，利用流式细胞术和q-PCR技术验证了，与健康对照人群比较，OLP患者外周血中Treg细胞表面高表达IL-6R，且损害部位角质形成细胞IL-6转录升高；再次，本项目建立了OLP患者Treg/效应T细胞与健康人Treg/效应T细胞的交叉培养体系，验证了OLP患者Treg功能受损，而排除了效应T细胞对Treg细胞的敏感性下降；最后，以重组人IL-6处理OLP患者Treg细胞，发现其抑制功能进一步下降；而中和上清中IL-6后，其抑制率升高。本研究以IL-6分布刺激来源于OLP患者与健康人的Treg细胞，发现OLP患者Treg细胞Stat3的磷酸化水平升高，提示，与对照组比较，OLP患者来源的Treg细胞对IL-6的敏感性更高。总之，本项目的研究结果显示，OLP患者抗原提呈细胞IL-6分泌水平升高，且OLP患者Treg细胞对IL-6的敏感性增高；二者的效果叠加后，IL-6展示出对Treg细胞的功能抑制作用，导致OLP患者体内Treg细胞功能缺陷，即使OLP患者Treg细胞数量存在补偿性提高，却依然无法发挥有效的负性免疫调节作用。本项目的结果提示，IL-6导致的Treg细胞功能缺陷可能是OLP慢性炎症迁延不愈和反复发作的原因。

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