上调miR-27b表达对口腔扁平苔藓上皮细胞凋亡的调节机制

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81170967
项目类别：
面上项目
资助金额：
60.0万
负责人：
唐国瑶
依托单位：
上海交通大学
学科分类：
H1504.牙周及口腔黏膜疾病
结题年份：
2015
批准年份：
2011
项目状态：
已结题
起止时间：
2012-01-01 至2015-12-31

项目参与者：
孙红英；周永梅；沈雪敏；吴岚；王宇峰；姚辉；张文怡；吴明桃；杜观环；
关键词：
miR-27b 角质形成细胞 Bax 凋亡口腔扁平苔藓

项目摘要

细胞凋亡增多是口腔扁平苔藓（OLP）重要发病机制之一。本项目预实验显示：OLP损害组织中miR-27b表达水平比正常下调4.21倍，且在正常组、白纹型OLP、萎缩糜烂型OLP的表达量依次下降，且表达下调发生在角质形成细胞层。以上定量定位研究提示，MicroRNAs可能参与调控OLP细胞凋亡过程。本项目深入到功能研究，以miR-27b预测的靶蛋白Bax为突破口，首先建立混合细胞培养模型，作为观察miR-27b在OLP病理环境下发挥功能的载体；其次，将miR-27b转染到OLP上皮细胞，以观察miR-27b通过调控Bax对细胞凋亡的影响；再次，通过报告基因方法验证miR-27b与Bax的序列互补关系；最后，检测TNF-α对miR-27b过表达的OLP上皮细胞发生凋亡的影响。本项目将miRNAs引入OLP领域，将深化对OLP发病分子机制的认识，为寻找治疗OLP的特异性靶点提供理论基础。

结项摘要

口腔扁平苔藓（OLP）是口腔黏膜疾病中常见的慢性自身免疫性疾病，但目前该病缺乏根本有效的治疗方法。近年来研究发现，细胞凋亡异常是口腔扁平苔藓（OLP）重要发病机制之一。本项目实验显示：通过高通量测序技术检测发现，OLP损害组织中miR-27b表达水平比正常下调3倍。此研究提示，MicroRNAs可能参与调控OLP细胞凋亡过程。本项目深入到功能研究，以寻找miR-27b的预测靶蛋白为突破口，首先通过报告基因方法，验证了miR-27b与PPIF的序列互补关系，同时功能性实验表明，miR-27b可负调控PPIF蛋白；其次，建立稳定表达miR-27b的单一细胞模型——ARPE19细胞，作为观察miR-27b发挥功能的载体；再次，建立稳定表达PPIF的细胞系，作为观察miR-27b通过调控PPIF对细胞凋亡影响的载体；最后，临床分离OLP原代角质形成细胞，再次验证上述部分实验结果。本研究证实PPIF是miR-27b的关键靶蛋白，由于PPIF是内线粒体膜上线粒体通透性转换孔的一部分，激活的孔隙被认为可参与诱导凋亡和坏死细胞的死亡。本项目发现，ARPE19细胞高表达miR-27b处理后，剪切型的PARP1和Caspase3的含量增加；ARPE19细胞低表达miR-27b处理后，剪切型的PARP1和Caspase3的含量减少；而稳定性低表达PPIF的ARPE19细胞中，剪切型的PARP1和Caspase3的含量增加，稳定性高表达PPIF的ARPE19细胞中，剪切型的Caspase3的含量减少，这与低表达miR-27b处理后的结果一致，可能与其负调控PPIF机制相关；另一方面，本研究发现，正常口腔粘膜组织中，凋亡多发生在上皮层的表层以及近基底层的固有层，而OLP损害组织中，凋亡分布于上皮层以及固有层全层；同时，免疫组化实验结果显示，与正常口腔黏膜组织相比，OLP中PPIF蛋白呈高表达，且在上皮层和固有层均呈阳性表达。因此，OLP患者PPIF表达上调可能为miR-27b参与OLP上皮细胞凋亡机制提供初步线索。