利用SILAC定向筛选K63泛素连接修饰的蛋白质底物和K63泛素连接新生物学功能的系统研究

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基本信息

项目摘要

泛素是一种高度保守的小蛋白，并通过其自身C-末端甘氨酸的羧基与目的蛋白赖氨酸的ε-氨基共价结合形成泛素化。已连接到蛋白质底物上泛素单体的赖氨酸被后续的泛素分子修饰形成7种不同的泛素连接。其中K6、K11、K27、K29、K33和K48泛素连接引导蛋白质降解分子信号，而K63除主要通过蛋白质聚类、转运、DNA修复等非蛋白质降解功能调节多样的细胞生命活动过程外，也不排除其修饰个别蛋白质底物并引导降解的可能。本研究旨在根据泛素连接结构特征和多重SILAC定量蛋白质组学原理，利用双重标签标记的泛素和纯化技术系统地定向筛选K63泛素连接修饰的目标底物，结合K63泛素连接可能引导蛋白质底物降解的生物学原理定量比较鉴定可能的底物，发现并验证K63泛素连接新生物学功能，并为相关的人类疾病分子机制研究和新药研发提供思路、技术和可能的靶标。

结项摘要

本研究开发了一种正向筛选某一种泛素链特异性底物的方法，通过基因工程改造酵母的泛素基因，构建在同一细胞中两种不同亲和纯化标签标记的人工泛素基因突变体Ub K63（只保留第63位赖氨酸，其它6个赖氨酸被精氨酸替代，简称Ub K63），通过串联亲和纯化富集了高纯度、高可信的特异性泛素链修饰的底物蛋白，通过定量蛋白质组学技术大规模系统正向鉴定了特异性泛素链的底物；以期在此基础上系统研究K63泛素链的新生物学功能。

项目成果

期刊论文数量（41）
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专利数量（2）
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  • 作者：
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  • 通讯作者：
    He F
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  • 发表时间：
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  • 期刊：
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  • 影响因子：
    4.4
  • 作者：
    Wang，Quanhui;Wen，Bo;Liu，Siqi
  • 通讯作者：
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  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    Journal of Proteome Research
  • 影响因子：
    4.4
  • 作者：
    徐平
  • 通讯作者：
    徐平
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  • DOI：
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  • 发表时间：
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  • 期刊：
    JOURNAL OF PROTEOME RESEARCH
  • 影响因子：
    4.4
  • 作者：
    Chang, Cheng;Li, Liwei;Xu, Ping
  • 通讯作者：
    Xu, Ping
利用一种含有细胞穿膜肽的基于酶活性的小分子探针对活细胞中半胱氨酸组织蛋白酶活性表达谱的研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    Journal of Proteome Research
  • 影响因子：
    4.4
  • 作者：
    徐平;樊峰凯
  • 通讯作者：
    樊峰凯

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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