水泡性口炎病毒G蛋白受体的筛选及鉴定

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31072107
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    35.0万
  • 负责人：
    宋德光
  • 依托单位：
    吉林大学
  • 学科分类：
    C1801.基础兽医学
  • 结题年份：
    2013
  • 批准年份：
    2010
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2011-01-01 至2013-12-31

项目摘要

水泡性口炎病毒(VSV)是引起人和多种哺乳动物水泡性口炎的重要病原，但其感染的分子机制尚不明确。囊膜糖蛋白（G蛋白）在病毒感染过程中发挥重要作用，G蛋白受体在病毒感染过程中的致病机制也已成为研究的热点。本项目在体外原代培养新生犊牛口腔黏膜上皮细胞的基础上，构建含有VSV-G蛋白基因片段的诱饵质粒，采用酵母双杂交技术筛选上皮细胞膜中与VSV-G相互作用的受体基因；将筛选出的受体基因进行克隆和表达，应用镍离子亲和层析柱纯化表达的受体蛋白，将该蛋白与VSV孵育后接种口腔黏膜上皮细胞，检测该蛋白在VSV感染过程中的功能；采用荧光定量RT-PCR方法检测受体在体外培养细胞中的表达情况。本课题不仅为研究G蛋白及其受体在水泡性口炎发病机制中的作用奠定基础，同时有助于揭示病毒的感染途径和复制过程等一系列科学问题，而且为该病的防治和抗病育种提供重要的靶基因。

结项摘要

水泡性口炎病毒（VSV）是引起人和多种哺乳动物水泡性口炎的重要病原，其感染细胞的分子机制目前还不明确。为研究VSV在细胞膜上的受体，本项目以实验室前期分离的牛源VSV为研究对象，开展了VSV易感的牛肾细胞（MDBK）受体的筛选和鉴定工作。首先成功构建了用于酵母双杂交的MDBK细胞cDNA文库，用于下一步受体的筛选。同时，构建了VSV-G蛋白诱饵表达载体，并对其自激活和毒性进行了检测，表明构建的诱饵质粒并无自激活和毒性作用，可以用于酵母双杂交。将文库菌液与诱饵菌液杂交混合培养，将杂交产物于固体培养基上进行多次培养，筛选出两种与VSV-G相互作用的蛋白：半乳糖凝集素1（LGALS1）和核糖体蛋白S20（RPS20）。经验证，筛选得到的两种猎物质粒均能与诱饵蛋白而非PGBKT7空载体发生相互作用。分别将LGALS1和RPS20的基因片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中，构建LGALS1的重组质粒pGEX-4T-L和RPS20的重组质粒pGEX-4T-R，诱导表达LGALS1和RPS20蛋白，并对其进行了纯化，western blot检测结果表明二者成功表达。His pull-down试验对筛选到的两种蛋白与VSV-G蛋白间的相互作用进行了验证，表明GST-R融合蛋白能够与VSV-G蛋白在体外发生特异性结合，但相互作用较弱，而GST-L融合蛋白与VSV-G蛋白在体外发生特异性结合的相互作用较强；间接免疫荧光证实LGALS1和VSV-G在BHK-21细胞中可发生相互作用；将pN1-LGALS1和pEF1α-VSV-G共转染至BHK-21细胞中，通过免疫共沉淀试验进一步验证了LGALS1和VSV-G在细胞中的相互作用。应用荧光定量RT-PCR方法对VSV感染MDBK细胞前后LGALS1和RPS20的表达情况进行检测结果表明，感染后LGALS1和RPS20的表达量均有显著提高，提示这两种蛋白可能在VSV感染细胞有重要的意义。将VSV与表达的LGALS1蛋白相互作用后再接种细胞，与对照组相比，感染细胞出现CPE明显减少的特点，表明该蛋白具有干扰VSV对细胞的感染作用。但RPS20蛋白对VSV感染细胞的阻断效果相对较弱。综合以上结果分析，LGALS1可能为VSV感染细胞的受体蛋白。本研究为深入开展VSV的感染、复制和一系列的分子致病机制研究奠定了基础。

项目成果

期刊论文数量（4）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（1）
水泡性口炎病毒糖蛋白主要抗原决定区片段基因的原核表达和纯化
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2011
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    张巍;王丽;孙晨;孙秀萍;苏高莉;赵魁;陈克研;宋德光
  • 通讯作者：
    宋德光
水泡性口炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    孙晨;王丽;孙秀萍;苏高莉;潘伟;赵魁;宋德光
  • 通讯作者：
    宋德光
Development of a convenient immunochromatographic strip for the diagnosis of infection with vesicular stomatitis virus serotype new jersey
开发一种方便的免疫层析试纸条，用于诊断水疱性口炎病毒血清型新泽西州感染
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    Journal of Virological Methods
  • 影响因子：
    3.1
  • 作者：
    Deguang Song;Kui Zhao;Keyan Chen;Wenqi He;Gaoli Su;Xiuping Zhang;Li Wang;Wei Pan;Wei Zhang
  • 通讯作者：
    Wei Zhang
水泡性口炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    中国预防兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    宋德光;宋晗星;苏高莉;周平;何叶;王丽;潘伟;丁宁;包英夫
  • 通讯作者：
    包英夫

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其他文献

宿主基因TBL1XR1沉默对水疱性口炎病毒复制的影响
  • DOI：
    10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.12.01
  • 发表时间：
    2019
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    孙诗惠;王仁铃;宋德光;贺文琦;高丰;关继羽
  • 通讯作者：
    关继羽
猪血凝性脑脊髓炎病毒在人工感染仔猪体内侵染过程和分布规律的研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国预防兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    宋德光;臧德跃;张冰冰;王栋;高丰;赵魁;陈克研;贺文琦
  • 通讯作者：
    贺文琦
羊口疮病毒农安分离株的分离鉴定及Orf059(F1L)基因的序列分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    赵魁;孙秀萍;何叶;周平;潘伟;包英夫;李吉达;宋德光;高丰
  • 通讯作者：
    高丰
猪血凝性脑脊髓炎病毒抑制神经细胞干扰素的产生
  • DOI：
    10.16303/j.cnki.1005-4545.2017.04.04
  • 发表时间：
    2017
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    岳慧青;杨雅雯;姜丹;张竞;石俊超;潘伟;贺文琦;高丰;宋德光
  • 通讯作者：
    宋德光
猪血凝性脑脊髓炎病毒HE基因的克隆及原核表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国生物制品学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    李志萍;高丰;贺文琦;常灵竹;宋德光;陆慧君;陈克研
  • 通讯作者：
    陈克研

其他文献

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宋德光的其他基金

VSV通过上调GSDME蛋白诱发细胞焦亡的机制研究
  • 批准号：
  • 批准年份：
    2020
  • 资助金额：
    58 万元
  • 项目类别：
    面上项目
水泡性口炎病毒致脑损伤过程中互作蛋白的筛选及其功能分析
  • 批准号：
    31572473
  • 批准年份：
    2015
  • 资助金额：
    64.0 万元
  • 项目类别：
    面上项目
口腔黏膜上皮细胞膜水泡性口炎病毒受体的筛选与鉴定
  • 批准号：
    30871874
  • 批准年份：
    2008
  • 资助金额：
    8.0 万元
  • 项目类别：
    面上项目

相似国自然基金

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相似海外基金

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AI项目解读示例

课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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