糖基因C3orf39:肝星状细胞增殖调控的新靶点？

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81071411
项目类别：
面上项目
资助金额：
36.0万
负责人：
魏红山
依托单位：
首都医科大学
学科分类：
H2209.病原生物与感染研究新技术与新方法
结题年份：
2013
批准年份：
2010
项目状态：
已结题
起止时间：
2011-01-01 至2013-12-31

项目参与者：
张黎颖；黄玉波；田静华；郝晓花；常露丝；乔雍；郭晶晶；
关键词：
肝纤维化肝星状细胞糖基因糖基转移酶糖基化修饰

项目摘要

肝星状细胞（HSC）功能调控是肝纤维化发病机制中的关键环节。近期我们的工作证实人类糖基因C3orf39的表达与HSC功能调控相关。本研究：1）体外克隆表达人类功能未知糖基因C3orf39，制备其多克隆抗体，明确其表达分布特征与慢性乙型肝炎肝纤维化进程之间的关系；2）利用激光共聚焦技术观察该糖基转移酶在细胞内的定位；3）利用杆状病毒-Sf9表达系统表达该糖基转移酶，采用Biacore 3000分析技术明确其供体底物特异性；结合免疫共沉淀技术及生物质谱技术，明确其对Notch3胞外EGF样重复序列的修饰特征（受体底物分析）；4）利用RNA干扰技术，明确糖基因C3orf39表达变化对HSC增殖、凋亡及细胞外基质表达的影响，以及对Notch3分子细胞膜定位的影响，以期明确C3orf39表达变化在肝纤维化发生过程中可能的作用，为肝纤维化药物干预研究提供可能的新靶点。

结项摘要

在肝组织损伤修复过程中，肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的激活，表达过量的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)是肝纤维化发生的关键。在既往的研究过程中，我们发现，HSC激活过程中糖基因C30RF39表达增加。本研究旨在明确糖基因C30RF39表达的变化对HSC激活增值，以及细胞外基质表达的影响。本研究中，我们：1)克隆表达了人类糖基因C3ORF39，构建了该基因重组蛋白表达载体pET32a-C3ORF39转化大肠杆菌，获得了C3ORF39重组蛋白，免疫大白兔，制备了该重组蛋白多克隆抗体。2）利用所制备的多克隆抗体，我们首先对该糖基因组织分布特征，尤其是在肝组织中的表达特征进行了观察。3）利用所构建的pEGFP-C1-C3ORF39荧光蛋白重组质粒，对该糖基因在HepG2细胞内的定位分布特征进行了观察。4）利用所构建的pcDNA6.2-C3ORF39 的RNA干扰质粒，转化人HSC细胞系LX2，对抑制C3ORF39表达后LX2细胞增殖及细胞外基质表达情况进行了分析。5）利用免疫共沉淀技术，我们对C3ORF39与Notch分子之间的相互作用进行了分析。本研究的结果显示，1）人类糖基因C3ORF39主要表达于肝非实质细胞，HSC高表达；免疫组织，如淋巴结及脾脏的生发中心淋巴细胞弱表达。以上数据提示，人类糖基因C3ORF39在肝组织和免疫细胞内表达，可能与Notch分子的糖基化修饰有关。该分子功能的研究有助于Notch分子介导的细胞功能调控分子机制的阐述。