GRP78保护胰岛β细胞与重建IDDM免疫耐受效应与机制研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
30972734
项目类别：
面上项目
资助金额：
30.0万
负责人：
沈关心
依托单位：
华中科技大学
学科分类：
H1107.自身免疫性疾病
结题年份：
2012
批准年份：
2009
项目状态：
已结题
起止时间：
2010-01-01 至2012-12-31

项目参与者：
廖雯君；张悦；杨娟；洪怡；代维；孙丽芳；刘颖；
关键词：
调节性T细胞 GAD反应性T细胞 I型糖尿病 GRP78

项目摘要

I型糖尿病（IDDM）是一种主要由T细胞介导的器官特异性自身免疫病，本课题拟在前期研究免疫损伤与保护胰岛β细胞工作的基础上，设计以I型糖尿病（IDDM）发生相关的抵抗因子GRP78和免疫损伤相关的重要靶分子GAD65为切入点，采用来源于非肥胖性糖尿病小鼠（NOD 小鼠）的NIT-1 β细胞株作为体外研究模型，将糖尿病发生相关的抵抗因子GRP78基因导入该细胞株，观察其抗损伤因子诱导的凋亡作用；同时应用GRP78蛋白及糖尿病发生相关的重要靶分子GAD65分别诱导调节性T细胞（CD4+CD25+FOXP3+T，Treg）克隆和GAD65致病性自身反应T细胞克隆，以NOD鼠为体内研究动物模型，通过体内外实验探讨Treg细胞克隆对GAD特异性T细胞和NOD鼠自身反应性T细胞的调节作用，以及对自身免疫性糖尿病胰岛β细胞的保护机制, 从而为保护胰岛细胞免受损伤和免疫调控治疗IDDM提供新的策略。

结项摘要

I 型糖尿病（IDDM）是一种主要由T 细胞介导的器官特异性自身免疫病，本课题在前期研究免疫损伤与保护胰岛β细胞工作的基础上，以I 型糖尿病（IDDM）发生相关的抵抗因子葡萄糖调节蛋白（GRP78）、共抑制分子（PDL1），以及IDDM相关的免疫损伤重要靶分子GAD65 为切入点，构建了小鼠GRP78真核表达载体，并在CHO细胞中获得稳定大量表达，为体内外实验研究提供了表达蛋白；同时构建了GRP78慢病毒载体及其干扰载体。采用来源于非肥胖性糖尿病小鼠（NOD 小鼠）的NIT-1 β细胞株作为体外细胞研究模型，将糖尿病发生相关的抵抗因子GRP78 基因和PDL基因分别导入该细胞株，观察了其抗损伤因子诱导的凋亡作用，研究证明转染GRP78的NIT-1 β细胞株可抵抗损伤因子诱导的细胞凋亡作用，并首次证明可通过影响钙离子通道发挥抗凋亡作用。.体外应用构建表达的GRP78 蛋白，LPS分别对小鼠骨髓来源DC的诱导作用，制备表达的GRP78蛋白可抑制骨髓来源的树突状细胞（DC）成熟，并可显著抑制LPS诱导的骨髓来源的树突状细胞（DC）成熟，首次证明GRP78可诱导未成熟DC，即耐受性DC（Tol-DC）的形成，并建立了GRP78耐受性DC（GRP78-Dol-DC），GRP78-Dol-DC可诱导负性调节性T细胞（调节性T 细胞（CD4+CD25+FOXP3+T，Treg）的产生，为体内外研究奠定了基础；在前期研究证明GRP78在链脲佐菌素（STZ）损伤糖尿病小鼠胰岛β细胞不同时期表达变化的基础上，进一步研究GRP78对胰岛β细胞的保护作用与免疫负调功能，首次以STZ和GAD65联合诱导小鼠糖尿病模型，研究证明GRP78和PDL可延缓小鼠糖尿病的发生；以NOD小鼠为研究模型，研究转染GRP78基因的胰岛β细胞以及联合应用GRP78-Dol-DC在体内诱导Treg细胞及其调节作用，对小鼠发病的影响，初步证明具有延缓小鼠糖尿病的发生，实验动物尚在进一步观察中。