蒙药乳腺-Ⅰ号治疗实验动物乳腺增生症的作用靶点及分子机制研究

The cyclomastopathy is 75 percents of all the breast diseases and it may be cancerizated during the process of disease.Our previous experimental work indicats that Mongolian medicine RuXian-I can treat cyclomastopathy by improving the pathological status of breast tissue, regulating the serum sex hormone levels and decreasing the expressions of estrogen and androgen in breast tissue and so on;a plurality of differential protein spots has been found by proteomics technique. This study intends to use molecular biological techniques such as cell culture, RNA interference, report gene and so on toexplore the effects of these differentially expressed proteins in the development process of cyclomastopathy and observe the influence of RuXian-I in proliferation related signal pathways ( NF-kB, MAPK, Pi3K/AKT etc.) in breast cells. Through the RuXian-I intervention in the the cyclomastopathy animal models, the expressions of the key protein spots were detected, and the changes of target molecules and proliferation related signal pathways and the correlation with curative effect were analyzed in order to clarify the therapeutical targets and intracellular signal transduction pathways of Mongolian medicine RuXian-I in the treatment of cyclomastopathy and lay a theoretical foundation for further study on molecular mechanism of Mongolian medicine RuXian-I in treatment of cyclomastopathy.

乳腺增生病占全部乳腺疾病的75％，在连续渐进的演变过程中可能发生癌变。前期实验研究表明蒙药乳腺-Ⅰ号可通过改善乳腺组织病理状况，调节血清性激素水平，降低乳腺组织雌、孕激素受体表达等作用治疗乳腺增生，而且通过蛋白质组学技术找到与蒙药乳腺-I号治疗作用相关的多个差异蛋白点。本研究拟利用细胞培养、RNA干涉技术、报告基因等分子生物学技术，探索在乳腺增生发生发展过程中这些差异表达蛋白的作用；通过体外细胞培养，研究蒙药乳腺-Ⅰ号对乳腺细胞中与细胞增殖相关信号通路（NF-kB、MAPK、Pi3K/AKT等）强度的影响，并且通过蒙药乳腺-I号对乳腺增生动物模型的干预，检测关键蛋白点的表达情况，检测靶标分子和增殖相关信号的变化及其与疗效之间的相关性，以期阐明蒙药乳腺-Ⅰ号治疗乳腺增生症的蛋白靶点及细胞内信号转导途径。为蒙药乳腺-I号治疗乳腺增生症的分子作用机制进行有益的探索。

乳腺增生病占全部乳腺疾病的75％，在连续渐进的演变过程中可能发生癌变，对广大妇女的身心健康形成威胁。传统蒙药乳腺-I号在治疗此病方面有独到的功效，实验研究表明该药能降低乳腺组织对雌二醇（E2）的敏感性，能有效抑制乳腺增生。我们利用差异蛋白质组学技术，提取经过蒙药乳腺-I号处理过的大鼠乳腺增生模型的组织和血清及其对照组的总蛋白进行荧光免疫（DIGE），通过图象分析，得到处理组和对照组的差异蛋白质点图谱，进行质谱鉴定，利用PMF和蛋白质数据库检索，找到蒙药乳腺-I号作用下大鼠乳腺增生模型的E2信号传导通路的相关蛋白和基因，以期在蛋白质水平明确蒙药乳腺-I号对乳腺增生病的分子作用机制。本课题在前期研究基础上，对蒙药乳腺-Ⅰ号治疗乳腺癌细胞进行研究，研究发现蒙药乳腺-Ⅰ号并不能对乳腺癌细胞有明确的作用，于是我们将课题转为两方面：一是蒙药乳腺-Ⅰ号治疗大鼠乳腺增生症的作用靶点及分子机制研究。本研究成功复制蒙药乳腺-Ⅰ号治疗乳腺增生大鼠模型，检测结果表明蒙药乳腺-Ⅰ号对乳腺增生大鼠无毒性，且可缓解乳腺增生大鼠血清性激素水平和组织病理学变化；而后研究其治疗的分子机制，首先结果表明蒙药乳腺-Ⅰ号可调节乳腺增生大鼠乳腺组织的E2及mRNA表达水平；而后结果表明蒙药乳腺-Ⅰ号治疗乳腺增生症的分子机制可能与调节乳腺增生大鼠ERK、JNK、p38、NF-κB及IκBα蛋白的表达水平以改善机体炎症性损伤有关；最后结果表明蒙药乳腺-Ⅰ号治疗乳腺增生症的分子机制可能与CRYAB调节的内质网应激诱导的细胞凋亡有关。二是乳腺癌发病作用机制的研究。本研究通过整合分析GEO数据集并筛选三阴性乳腺癌的分子标记物，有助于三阴性乳腺癌的机理研究以及发现潜在的治疗靶标；AGR2可作为低病理级别三阴性乳腺癌中早期诊断和判定预后的标志性基因；miR-539可以与EGFR结合，对乳腺癌细胞有抑制作用，为乳腺癌的治疗提供潜在的靶标。

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