PPARγ和ANGPTL4基因表达在急性胰腺炎肺损伤发病机制中的作用及清胰汤的干预作用

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81173452
项目类别：
面上项目
资助金额：
65.0万
负责人：
陈海龙
依托单位：
大连医科大学
学科分类：
H3302.中西医结合临床基础
结题年份：
2015
批准年份：
2011
项目状态：
已结题
起止时间：
2012-01-01 至2015-12-31

项目参与者：
李海龙；张雪梅；范丽昕；姚艺文；宫爱霞；王玉玺；隋华；张经文；
关键词：
急性胰腺炎 ANGPTL4 清胰汤 PPARγ 肺损伤

项目摘要

急性肺损伤是SAP早期高死亡率的主要原因，机体过度失控的炎症反应以及促炎介质大量释放起着关键性作用。PPARγ和ANGPTL4可能是调控过度炎症反应的两个重要基因，ANGPTL4的表达水平受PPARγ激活的影响，ANGPTL4是PPARγ的下游靶标。应用pCAGGS和pLL3.7载体构建人ANGPTL4过表达和基因沉默质粒，用于体外研究hAngptl4基因对肺微血管内皮细胞渗透性的变化。通过动物实验和临床观察，利用免疫组化、免疫荧光、RT-PCR、Western Blot等多种细胞分子生物学技术和方法，探究急性胰腺炎肺损伤时PPARγ和ANGPTL4的基因表达规律及其对炎症反应调控的影响，应用清胰汤及含药血清进行干预，探究"肠病及肺"和"治病从肠"的"肺与大肠相表里"理论及中医通里攻下法防治作用的分子生物学机制。

结项摘要

目的：观察Angptl4和它的靶基因PPAR-γ在SAP大鼠肺组织及肺微血管内皮细胞上的表达变化，探究清胰汤及基因转染技术的干预作用。.方法：雄性SD大鼠，采用1.5%的去氧胆酸钠溶液(l ml/kg)逆行胰胆管注射法建立SAP动物模型。24h后，测定肺组织中Angptl4和PPAR-γmRNA及蛋白的表达，肺微血管壁上VEGF的表达和胰腺细胞的BCL-2的表达。.应用大鼠肺微血管内皮细胞系，药物作用24 h后，检测细胞中Angptl4的表达。应用脂多糖刺激后观察细胞存活情况以及形态结构学改变。　.以大鼠Angptl4基因为模板，构建pcDNA3.1-eGFP-Angptl4质粒，转染大鼠肺微血管内皮细胞。48 h后观察细胞中Angptl4表达变化。分组检测细胞信号通路上的p-MEK1/2 , p-AKT/AKT, Bax , casapase 8, 9蛋白的变化。.结果：1. SAP时肺组织中Angptl4 mRNA和蛋白表达水平明显增高，而PPAR-γmRNA基因和蛋白的表达却明显降低。罗格列酮干预组肺组织Angptl4和PPAR-γ表达水平明显上升，肺血管内皮细胞上的VEGF和胰腺腺泡上的BCL-2明显受抑制。2. LPS组刺激24 h后Angptl4蛋白表达增加，而应用Angptl4促进剂罗格列酮后，Angptl4蛋白表达增加明显。3. pcDNA3.1-eGFP-Angptl4质粒转染后肺微血管内皮细胞中Angptl4表达明显增加。促凋亡因子Bax蛋白与casapase 8, 9蛋白在LPS组明显增加，而在应用罗格列酮组与转染目的基因组明显降低。LPS+pcDNA3.1-eGFP-Angptl4组凋亡通路上的调节蛋白p-AKT/AKT和p-mek1/2蛋白明显下调。.结论：Angptl4和PPAR-γ是一种能干预炎症因子生成正性蛋白，它们的增加能抑制炎症反应，维持肺微血管内皮细胞形态的稳定，对抗炎症反应导致的细胞凋亡，从而减轻SAP诱发的ALI。清胰汤在SAP的治疗上有着独特的优势，能够改善SAP时肺功能。