花生四烯酸细胞色素P450（AA-CYP）表氧化酶代谢物EETs抗心肌内质网应激损伤、防治心力衰竭的作用及机制研究

心力衰竭是心血管疾病发展到终末期的临床症候群，我们前期在人心力衰竭及心力衰竭动物模型中均证明衰竭的心肌内质网应激反应及其相关凋亡通路被显著激活，而阻断内质网应激反应、恢复内质网功能即可预防和改善心力衰竭，因此内质网应激通路成为心衰潜在的治疗靶点。在系统研究花生四烯酸细胞色素P450（AA-CYP）表氧化酶代谢物EETs对心血管保护作用基础上，我们发现 EETs在体外能显著抑制内质网应激反应减少心肌细胞凋亡。本项目将在此基础上采用CYP表氧化酶2J2转基因小鼠和重组腺相关病毒介导的CYP表氧化酶基因转染动物及培养的心肌细胞，在体内和体外研究AA-CYP表氧化酶-EETs对心肌内质网应激通路的调节和抑制作用及作用机制。这将帮助阐明其内源性抗心肌内质网应激和心力衰竭的作用，为通过调节CYP表氧化酶-EETs系统预防和治疗心力衰竭提供新的思路，为开发防治心力衰竭新的药物和治疗手段提供理论依据。

心力衰竭是心血管疾病发展到终末期的临床症候群，我们前期在人心力衰竭及心力衰竭动物模型中均证明，衰竭的心肌内质网应激（ER stress）及其相关凋亡通路被显著激活，而阻断内质网应激、恢复内质网功能成为心衰潜在的治疗靶点。在系统研究花生四烯酸细胞色素P450（AA-CYP）表氧化酶代谢物EETs对心血管保护作用基础上，我们发现 EETs在体外能显著抑制内质网应激，减少心肌细胞凋亡。本项目采用CYP表氧化酶2J2转基因小鼠和腺相关病毒（rAAV）-CYP表氧化酶基因转染小鼠及培养的心肌细胞，在体内和体外研究AA-CYP表氧化酶-EETs对心肌内质网应激通路的影响。我们用异丙肾上腺素（ISO）或血管紧张素II（AngⅡ）诱导心肌肥大心力衰竭小鼠模型，结果发现ISO或AngⅡ均可以诱导内质网应激及细胞凋亡，并且可以升高细胞内钙离子浓度；而与野生型小鼠相比，心脏特异性过表达CYP2J2的转基因小鼠可以明显减轻内质网应激，降低胞内钙离子浓度，改善心力衰竭。利用rAAV-CYP表氧化酶基因转染小鼠可以得到相同的结果。同时我们体内体外的研究均提示，ISO和AngⅡ引起的心肌细胞内质网钙泵Ca2+-ATP酶（SERCA2a）表达及活性的降低，同时伴有的氧化型SERCA2a的增加，而过表达CYP2J2基因或加入外源性EETs都可以恢复SERCA2a活性，抑制SERCA2a氧化。EETs可以通过增加抗氧化酶的表达及降低活性氧的水平来逆转SERCA2a的氧化。同样的，给予氧自由基清除剂Tempol可以降低氧化型SERCA2a的水平、恢复SERCA2a的活性，同时可以明显的减轻内质网应激。此外，细胞内钙超载可引起ER stress及ER stress介导的凋亡，钙调蛋白激酶II（CaMKII）是Ca2+依赖性激酶，在心衰小鼠中CaMKII过度激活能引起心肌细胞中钙离子浓度增加。与对照组相比，ISO或Ang II在体内体外均可以引起p-CaMKII的表达明显升高，而过表达CYP2J2或加入外源性EETs均可抑制p-CaMKII的过度激活，降低细胞内钙离子浓度。综上所述，我们的研究表明CYP2J2-EETs可能通过维持细胞内钙稳态、恢复内质网钙泵SERCA2a的功能和活性来抑制内质网应激，减少细胞凋亡，改善心力衰竭。本研究为认识心力衰竭的发生发展提供新的理论基础，为开发防治心力衰竭新的药物及治疗

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