微球化重组Mcl1/GDNF基因对老年耳蜗细胞损伤的修复作用

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    30973304
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    31.0万
  • 负责人：
    杨卫平
  • 依托单位：
    中国人民解放军总医院
  • 学科分类：
    H1403.耳及侧颅底疾病
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31
  • 项目参与者：
    杨卫平； 胡博华； 李新建； 于黎明； 胡吟燕； 郑贵亮； 于宁； 兰兰； 许阳；
  • 关键词：
    老年Mcl-1基因微球耳蜗

项目摘要

老年性聋是最常见的感音神经性聋，听觉功能下降极大地影响了日益增多的老年人的生活质量。由于耳蜗组织一直被认为是分裂期后终末分化的组织，细胞死亡后不能再生，如何使损伤的耳蜗细胞尽快恢复、避免死亡，成为学者们关注的焦点。促凋亡调控基因Bax表达增强是我们最新发现的老年耳蜗早期改变的细胞生物学特征，本项目拟选择抗细胞凋亡的上游调控基因McL1和抗老年耳蜗细胞损伤主要因素-自由基作用的GDNF基因构成重组子，将制备的微球化重组Mcl1/GDNF基因脂质体置入耳蜗圆窗龛，使微球缓慢释放的重组Mcl1/ GDNF基因脂质体经完整的耳蜗圆窗膜渗透到内耳，将目的基因转染老年耳蜗细胞，提高外源基因在内耳的表达水平，使其达到修复老年耳蜗细胞损伤、恢复听功能的作用。该研究对发现修复老年耳蜗细胞损伤的目的基因及建立最佳的基因内耳导入方法，降低老年性聋发病率，具有极大的临床应用价值和重要的社会意义。

结项摘要

背景 老年性聋是最常见的感音神经性聋，听觉功能下降极大地影响了老年人的生活质量。耳蜗基底膜感觉细胞的损伤是老年性聋的主要病理改变，损伤的毛细胞通过凋亡和坏死两种方式死亡，凋亡为老年耳蜗毛细胞死亡的主要方式。Mcl-1为Bcl-2家族抗细胞凋亡的主要调控基因之一，其在老年耳蜗表达水平下降。我们以Mcl-1为抗细胞凋亡的目的基因，观察其在大鼠内耳表达及对老年性聋的防护作用。.方法 将构建的Mcl-1和绿色荧光蛋白基因(pEGFP) 真核表达质粒置入大鼠耳蜗圆窗龛，经完整圆窗膜导入内耳细胞。分别于手术前和手术后应用电位反应测听仪检测不同频率短声诱发大鼠双侧听性脑干诱发电位反应(ABR)阈值。采用细胞核DNA荧光染料碘化丙锭(PI) 染色耳蜗基底膜细胞, 荧光显微镜下观察Mcl-1/pEGFP质粒在大鼠耳蜗基底膜细胞中的表达及内耳细胞核形态学变化。采用蛋白印迹和定量PCR(Quantitative RT-PCR) 方法检测手术后Mcl-1基因在耳蜗基底膜细胞蛋白和mRNA水平表达的变化。采用F-actin与PI双重染色法，进行Mcl-1基因内耳导入3m后耳蜗基底膜损伤毛细胞的定量观察, 计数凋亡、坏死的毛细胞。采用细胞色素C与PI双重染色法，观察Mcl-1基因内耳导入3m后，耳蜗基底膜细胞色素C阳性标记毛细胞数量的变化。.结果 Mcl-1基因内耳导入后15d，大鼠耳蜗感觉细胞和支持细胞的胞浆部位可见到明显的绿色荧光标记物。Mcl-1/pEGFP质粒不仅在大鼠的手术耳耳蜗基底膜细胞表达，也能在对侧非手术耳细胞内表达。Mcl-1的转染明显提高其在老年大鼠耳蜗细胞mRNA 和蛋白水平的表达。重要的是，Mcl-1基因的内耳导入减少了老年大鼠耳蜗基底膜毛细胞损伤的数量和提高了听觉功能。Mcl-1基因导入3个月后，治疗耳的耳蜗基底膜毛细胞损伤数目少于老年大鼠对照耳17.15%±11.5，不同频率短纯音诱发的ABR阈值较老年大鼠对照耳的平均值降低12.7±3.21 dB。进一步研究发现，Mcl-1对老年听觉退行性变的防护作用主要与耳蜗细胞凋亡的抑制相关，凋亡的抑制作用发生在细胞的线粒体水平。.结论 Mcl-1表达的调控能够减轻老年耳蜗退行性改变，该研究对发现修复老年耳蜗损伤的目的基因及建立最佳的基因内耳导入方法，降低老年性聋发病率，具有极大临床应用价值和重要的社会意义。

项目成果

期刊论文数量（6）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（5）
专利数量（0）
人MCL1基因表达载体的构建及在293细胞中的表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中华耳科学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    郭维维;杨卫平;马龙;许阳;胡博华
  • 通讯作者：
    胡博华
老年Fischer 344大鼠耳蜗损伤的外毛细胞的定量观察
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    解放军医学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    杨卫平;胡博华;Donald Henderson
  • 通讯作者：
    Donald Henderson
Age-related changes in the ratio of Mcl-1/Bax expression in the rat cochlea.
大鼠耳蜗中 Mcl-1/Bax 表达比值的年龄相关变化
  • DOI：
    10.3109/00016489.2011.631191
  • 发表时间：
    2012-02
  • 期刊：
    Acta oto-laryngologica
  • 影响因子：
    1.4
  • 作者：
    Yang WP;Guo WW;Liu HZ;Xu Y;Chen L;Hu BH
  • 通讯作者：
    Hu BH
老年大鼠耳蜗毛细胞凋亡的信号通路
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中华耳科学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    杨卫平;胡博华;Donald Henderson
  • 通讯作者：
    Donald Henderson
丝状肌动蛋白在噪声致耳蜗不同阶段凋亡坏死毛细胞中的变化
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    杨卫平
  • 通讯作者：
    杨卫平

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耳蜗核神经递质受体及离子通道的改变与老年性聋的关系
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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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