preS1多肽分子连接体转运siRNA靶向抑制HBV的实验研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
30972582
项目类别：
面上项目
资助金额：
30.0万
负责人：
陈维贤
依托单位：
重庆医科大学
学科分类：
H2103.肝炎病毒与感染
结题年份：
2012
批准年份：
2009
项目状态：
已结题
起止时间：
2010-01-01 至2012-12-31

项目参与者：
黄英；彭辉；唐波；李月；娄茜；
关键词：
人鼠崁合肝 HBV preS1 RNAi 分子连接体

项目摘要

乙型肝炎是严重威胁人类健康的传染性疾病，目前治疗手段仍有较大局限性。RNA干扰可能成为HBV基因治疗的有效手段，但急需解决siRNA传输载体和治疗的靶向性问题。preS1是HBV结合并侵袭肝细胞的配体，其21-47aa多肽片断对结合肝细胞至关重要，具有肝细胞靶向性。在配体分子的N/C端加上精氨酸多聚体，可以将配体改造成为具有结合siRNA和靶向结合并进入特定细胞能力的分子连接体。本项目拟在前期工作基础上，合成preS1 21-47aa和9精氨酸多聚体崁合多肽（2147R），分别在细胞模型和人鼠崁合肝转基因小鼠模型上验证该分子连接体转运siRNA抑制HBV复制和表达的效果。本课题的实施，将为RNA干扰技术在HBV感染的临床应用上提供新的思路，具有极大的理论意义和应用价值。

结项摘要

乙型肝炎病毒影响到超过3亿人的健康，每年约有100万人死于乙肝相关疾病。目前对付HBV感染主要依赖干扰素和核酸类似物，但存在副作用较大、病毒变异逃逸等问题。因此，新的治疗手段和新型药物的开发具有重要意义。RNA干扰在慢性病毒感染的治疗方面有着极大的应用前景，是HBV治疗的一种潜在的具有发展价值的方式，但目前仍然存在很多问题和障碍，包括siRNA在血液中的稳定性和半衰期、细胞对siRNA的摄入效率、siRNA的脱靶效应以及siRNA的靶向转运等等。其中最重要的一点就是如何将siRNA有效地转运到其作用部位，合适的转运载体对于siRNA的临床使用至关重要。本项目拟利用HBV preS1多肽靶向结合肝细胞的特点，在preS1 21-47aa多肽C端添加9精氨酸多聚体，将preS1多肽改造为结合siRNA并靶向肝细胞的分子连接体，转运siRNA至肝细胞达到特异性抑制HBV复制与表达的效果。合成的preS1 21-47aa和9精氨酸多聚体崁合多肽（2147R）分别在持续复制HBV细胞模型和HepG2.2.215小鼠肿瘤模型上验证了其转运siRNA抑制HBV复制和表达的效果。实验获得获得了以下研究结果：1）合成相应分子连接体及siRNA，验证了两者的结合能力。2）分子连接体可靶向转运siRNA进入肝源性细胞。3）分子连接体-siRNA复合物可以抑制细胞内源性HBV X基因的表达。4）分子连接体-siRNA复合物可以抑制细胞模型中HBV的表达和复制。5）分子连接体-siRNA复合物可以抑制动物模型中HBV的表达和复制。.在本项目的资助下，已发表论文6篇。其中SCI论著1篇，CSCD核心论文5篇。尚有一篇SCI论文在审稿之中，预计2013年能够见刊。通过本项目的实施，培养硕士研究生4名，1名已经毕业，3名在读。本课题的实施，锻炼了课题组年轻的研究队伍，使研究人员具备更好的实验技能和科研思维，掌握研究领域的前沿动态，进一步明确研究方向，为将来的发展奠定了基础。.基因治疗是目前研究热点之一，研究过程中存在许多不确定因素，属于探索性研究。本课题遇到的困难包含两方面，其一是建立转基因小鼠人鼠崁合肝HBV感染模型，后改为HepG2.2.215小鼠肿瘤模型替代。其二是转运载体的靶向性不如预期理想。这些问题拟在将来的研究中予以探索和解决。