内脏利什曼病多表位DNA疫苗和多表位抗原疫苗的构建及免疫策略研究

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    81672048
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    51.0万
  • 负责人：
    陈建平
  • 依托单位：
    四川大学
  • 学科分类：
    H2203.寄生虫与感染
  • 结题年份：
    2020
  • 批准年份：
    2016
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2017-01-01 至2020-12-31

项目摘要

In this study, the Amastin, A2 and FML genes of Leishmania donovani were analyzed by the DNA star soft and their antigenic epitopes were calculated. To increase the protective immunity of the recombinant vaccine, the fragments containing antigenic epitopes of T cell and CTL of the Amastin, A2 and FML genes and linker were linked with pCDNA3.1 to construct pCDNA3.1-amastin/A2, pCDNA3.1-amastin/fml, pCDNA3.1-A2/fml and pCDNA3.1-amastin/A2/fml with PCR.The immunogenicity and protective efficacy of 4 muti-epitopes DNA vaccine of Leishmania donovani were analyzed in animal experiments to determent the best muti-epitopes DNA vaccine. The best muti-epitopes DNA vaccine in immunogenicity and protective efficacy were linked with pET32a(+) to construct pET32a(+)-AAF with PCR，expressed in E.coli to obtain AAF muti-epitopes fusion antigens. The effect of immunifaction about immunization with DNA vaccine firstly and to enhance immunization with muti-epitopes fusion antigens secondly was analyzed in animal experiments. Our results of this project would lay good foundation for study of kala-azar vaccine development and to immunize dog for control the source of kala-azar infection.
本研究采用免疫信息学对利什曼原虫无鞭毛体蛋白（amastin）、A2蛋白和岩藻糖-甘露糖配合体（FML）进行T细胞抗原表位和CTL抗原表位分析，剔除抗原基因中不含T细胞表位和CTL表位片段，保留富含T细胞表位和CTL表位片段。选择上述3个抗原中富含T细胞表位和CTL表位的片段，再加上分子佐剂CpG，采用重叠PCR引入柔性连接肽(linker)和PCR加酶切技术构建利什曼原虫amastin/A2多表位DNA疫苗、A2/fml多表位DNA疫苗、amastin/fml/多表位DNA疫苗以及pCDNA3.1-amastin/A2/fml/多表位DNA疫苗，对4种多表位DNA疫苗进行免疫原性及免疫保护性评估以确定最佳的多表位DNA疫苗。并挑选具有最佳免疫效果的表位多肽序列，连接质粒pET32a(+)以构建真核表达质粒，表达纯化多表位抗原，通过接种犬来验证“核酸初免，蛋白加强”免疫策略的效果。

结项摘要

本研究采用免疫信息学对利什曼原虫无鞭毛体蛋白（amastin）、A2蛋白和岩藻糖-甘露糖配合体（FML）、amastin、kmp11和gp63进行T细胞抗原表位和CTL抗原表位分析，剔除抗原基因中不含T细胞表位和CTL表位片段，保留富含T细胞表位和CTL表位片段。选择上述6个抗原中富含T细胞表位和CTL表位的片段，再加上分子佐剂CpG，采用重叠PCR引入柔性连接肽(linker)和PCR加酶切技术构建8个利什曼原虫多表位DNA疫苗。通过体外实验和动物实验筛选出最佳免疫原性和免疫保护性的利什曼原虫CaNA2-kmp11多表位DNA疫苗和amastin-gp63多表位DNA疫苗，并对2种多表位DNA疫苗进行免疫原性及免疫保护性评估。并通过基因克隆构建利什曼原虫CaNA2-kmp11多表位抗原疫苗和amastin-gp63多表位抗原疫苗，通过动物实验来验证“核酸初免，蛋白加强”免疫策略的效果。本研究构建了2种内脏利什曼病疫苗，为通过免疫犬来阻断黑热病流行提供了实验数据。

项目成果

期刊论文数量（8）
专著数量（3）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（4）
专利数量（0）
婴儿利什曼原虫Pepck和Gp63优势表位的 真核与原核重组载体的构建与表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2021
  • 期刊：
    四 川 大 学 学 报（ 医 学 版 ）
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    张建辉;王玉洁;何金蕾;李焕卿;陈劲宇;陈达丽;陈建平
  • 通讯作者：
    陈建平
Multi-locus characterization and phylogenetic inference of Leishmania spp. in snakes from Northwest China
利什曼原虫属的多位点特征和系统发育推断。
  • DOI：
    10.1371/journal.pone.0210681
  • 发表时间：
    2019
  • 期刊：
    PLos One
  • 影响因子：
    3.7
  • 作者：
    Chen Han;Li Jiao;Zhang Junrong;Guo Xianguang;Liu Jinlong;He Jinlei;Song Qi;Zhang Jianhui;Chen Minli;Zheng Zhiwan;Chen Dali;Chen Jianping
  • 通讯作者：
    Chen Jianping
Integrative genomic, proteomic andphenotypic studies ofLeishmania donovani strains revealed genetic features associated withvirulence andantimony-resistance.
杜氏利什曼原虫菌株的综合基因组、蛋白质组和表型研究揭示了与毒力和锑抗性相关的遗传特征。
  • DOI：
    10.1186/s13071-020-04397-4
  • 发表时间：
    2020
  • 期刊：
    Parasites & Vectors
  • 影响因子：
    3.2
  • 作者：
    Zheng Zhiwan;Chen Jianping;Guangxu Ma;Abhay R. Satoskar;Li Jiao
  • 通讯作者：
    Li Jiao
Evaluation of in vitro antileishmanial efficacy of cyclosporin A and its non-immunosuppressive derivative, dihydrocyclosporin A
环孢菌素 A 及其非免疫抑制衍生物二氢环孢菌素 A 的体外抗利什曼病疗效评价
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2020
  • 期刊：
    Parasites & Vectors
  • 影响因子：
    3.2
  • 作者：
    Zheng Zhiwan;Li Jiao;Chen Han;He Jin-Lei;Chen Qi-Wei;Zhang Jian-Hui;Zhou Qi;Chen Da-Li;Chen Jianping
  • 通讯作者：
    Chen Jianping
DNA prime-protein boost vaccine encoding HLA-A2, HLA-A24 and HLA-DR1 restricted epitopes of CaNA2 against visceral leishmaniasis
编码 HLA-A2、HLA-A24 和 HLA-DR1 CaNA2 限制性表位的 DNA 初蛋白加强疫苗，抗内脏利什曼病
  • DOI：
    10.1111/imm.13007
  • 发表时间：
    2019
  • 期刊：
    Immunology
  • 影响因子：
    6.4
  • 作者：
    He Jinlei;Huang Fan;Zhang Jianhui;Chen Han;Chen Qiwei;Zhang Junrong;Li Jiao;Zheng Zhiwan;Chen Dali;Chen Jianping
  • 通讯作者：
    Chen Jianping

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  • 通讯作者：
    陈建平

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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