miR-33和miR-199a在黑色素瘤转移中的作用及机制探讨

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基本信息

  • 批准号：
    81071645
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    35.0万
  • 负责人：
    周建大
  • 依托单位：
    中南大学
  • 学科分类：
    H1801.肿瘤病因
  • 结题年份：
    2013
  • 批准年份：
    2010
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2011-01-01 至2013-12-31

项目摘要

在前期皮肤黑色素瘤临床研究中发现miR-33和miR-199a与黑色素瘤的高转移显著正相关的基础上，本课题以miR-33和miR-199a基因过表达或表达抑制的B16F10细胞株和裸鼠种植瘤及肺转移瘤为模型，在细胞和动物水平验证miR-33和miR-199a对黑色素瘤转移和血管生成生物学特性的影响，然后以基因芯片技术探讨miR-33和miR-199a对肿瘤转移基因表达的调控，筛选出受miR-33和miR-199a调控的下游转移基因；并运用生物信息学和荧光素酶报告基因技术从转录水平探讨miR-33和miR-199a对转移基因表达的调控机制；最后在临床标本和B16F10细胞株中验证miR-33和miR-199a作用的下游基因对黑色素瘤转移的调控作用，为临床诊断和治疗提供理论指导，形成转化医学的研究模式。

结项摘要

1、设计了let-7b,miR-33和miR-199a的过表达质粒和inhibitor干扰片段，运用基因转染技术将对应组别的外源基因导入B16F10或A375细胞中，成功完成基因转染，并通过Real-time PCR、Western-blot、MTT法及流式细胞术分别从RNA水平、蛋白水平和细胞水平三方面检测let-7b，miR-33和miR-199a基因对黑色素瘤生长与增殖及凋亡的影响，证实了let-7b，miR-33和miR-199a的表达与黑色素瘤生长与侵袭存在显著相关性，负调控黑色素瘤细胞的生长和侵袭，为黑色素瘤的关键miRNA；. 2、进一步采用美国SABiosciences公司的鼠源肿瘤转移PCR芯片( PAMM-028A )，在已知的84个转移相关基因中筛选了受let-7b和miR-199a调控的相关基因，其中发现受到let-7b正向调控的基因包括有Kiss1、Apc、Cdh6、Ctnna1、Cd44、Hgf、Cdh1、Hras1；可能受到负向调控的基因包括有：Flt4、Kiss1r、Hpse、Igf1、Il1b等。在 miR-199a调控的黑色素瘤转移相关基因中，可能正向调控的基因有：Cd44、Cdh1、Ctbp1、Etv4、Fxyd5、Rpsa、Mycl1、Myc、Nme2、Cd82、Rb1、Tcf20、Hprt1、Actb1；可能负向调控黑色素瘤B16F10细胞生长、侵袭的基因有：Ctsk、Csf1、Ela2、P2ry5、Hras1、Ctsk、Itga7、Tnfsf10。验证发现Myc基因受miR-199a负调控,Tnfsf10基因受miR-199a正调控。.3、稳定转染过表达miR-33a的A375细胞株的构建及裸鼠肿瘤模型的建立。.4、黑色素瘤及黑色素痣临床标本的收集及检测。

项目成果

期刊论文数量（5）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
Let-7b and microRNA-199a inhibit the proliferation of B16F10 melanoma cells
Let-7b和microRNA-199a抑制B16F10黑色素瘤细胞的增殖
  • DOI：
    10.3892/ol.2012.878
  • 发表时间：
    2012-11-01
  • 期刊：
    ONCOLOGY LETTERS
  • 影响因子：
    2.9
  • 作者：
    Xu, Dan;Tan, Jianxiang;Zhou, Jianda
  • 通讯作者：
    Zhou, Jianda
MicroRNA在调控物质代谢方面的作用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    中南大学学报(医学版)
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    曹科;刘睿;周建大;罗成群
  • 通讯作者：
    罗成群
miR-33对B16F10细胞株增殖和凋亡的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    肿瘤研究与临床
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    李文波;周建大;谢慧清
  • 通讯作者：
    谢慧清
Let-7b和miR-199a对B16F10细胞增殖生长的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2011
  • 期刊：
    中国医师杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    罗成群;谭建湘;谢慧清;蒋碧梅;周鸣;刘海航;李明;张彦文;徐丹
  • 通讯作者：
    徐丹
Let-7b对人黑色素瘤细胞增殖及有氧糖酵解的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    中国医师杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    谢慧清;李明;李万猛;周鸣;罗成群;尹朝奇;陈铁夫;李萍;陈佳
  • 通讯作者：
    陈佳

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AI项目解读示例

课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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