分子改造Levan蔗糖酶拓展转糖基底物特异性研究
项目介绍
AI项目解读
基本信息
- 批准号:31070064
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:34.0万
- 负责人:
- 依托单位:
- 学科分类:C0102.微生物生理与生化
- 结题年份:2013
- 批准年份:2010
- 项目状态:已结题
- 起止时间:2011-01-01 至2013-12-31
- 项目参与者:卢丽丽; 钱卫; 刘倩; 徐淑泽; 张丽丽; 刘佳伟; 赵任飞;
- 关键词:
项目摘要
结构多样的寡糖库是糖基化修饰和糖链探针研究的基础。糖的多个羟基使特异糖苷合成的化学法步骤繁琐,应用难度大。生物酶法中的糖苷酶法糖基供体为简单糖类且糖基受体多样,工业实用性较好。Levan蔗糖酶能以蔗糖为底物转果糖基合成β-2,6果糖苷键组成的Levan类寡糖和聚糖。微生物来源的Levan蔗糖酶合成寡糖和聚糖的比例不同,表现出底物特异性差异,该特性是由酶分子中的某些氨基酸决定的。我们已经筛选到一株高产Levan聚糖的地衣芽胞杆菌,本项目进行该菌株Levan蔗糖酶的分离纯化和转糖基研究,酶基因克隆后序列分析推测酶分子中与转糖基反应的底物特异性可能有关的氨基酸,定点饱和突变建立突变酶库,筛选获得转糖基底物特异性拓展的突变酶。本项目完成不仅可填补国际上地衣芽胞杆菌Levan蔗糖酶系统研究的空白,而且转糖基底物特异性拓展的突变酶可作为酶法合成寡糖或糖苷化合物的有力工具,推进糖基化工程和糖药物的研发。
结项摘要
Levan蔗糖酶能以蔗糖为底物转果糖基合成β-2,6果糖苷键连接的果寡糖和果聚糖。微生物来源的Levan蔗糖酶合成寡糖和聚糖的比例不同,表现出底物特异性差异。本项目分离纯化了地衣芽孢杆菌8-37-0-1的Levan蔗糖酶,分子量约为50kDa,N-端氨基酸序列为KETQDYKKSY。该酶在0.8M的蔗糖溶液(pH 6.5)中,40℃反应24h,合成的Levan果聚糖分子量为2千万,反应48h后,Levan果聚糖的分子量稳定在4 百万。PCR扩增得到8-37-0-1菌株的Levan蔗糖酶基因sacB(GenBank No. KF647836),为1446bp,编码482个氨基酸,理论分子量为53.7kDa,第30-39个氨基酸序列完全对应于纯化获得的天然Levan蔗糖酶N-端氨基酸序列。分别将sacB和sacB-30在大肠杆菌中重组表达,表达sacB的重组菌培养液上清和细胞中均有酶活,而表达sacB-30的重组菌培养液上清没有酶活,细胞内有酶活。重组酶分别经镍亲和纯化,SDS-PAGE结果显示重组SacB-30蛋白为单一带(58kDa),重组SacB蛋白为两条带(51kDa和60kDa),蛋白肽指纹图分析结果均为Levan蔗糖酶。与天然酶相同条件下反应24h,重组SacB-30合成的Levan果聚糖分子量为1千万,反应48h后,果聚糖分子量与天然酶相同,反应中还生成少量果寡糖,鉴定其中三糖为新蔗果三糖(neokestose)和1-蔗果三糖(1-kestose)。重组酶具有广泛的糖基受体底物特异性,能以多种单糖、寡糖、糖醇、多种酚类及短链烷基醇类化合物为糖基受体合成果糖苷。分离获得了4种转糖基产物,果糖基分别以β(2,1)连接到糖受体上,显示出该酶以其他单糖和寡糖为转糖基受体合成果糖苷时具有显著不同于合成Levan果聚糖时的优选β(2,6)区域选择性。生物信息分析推测了Levan蔗糖酶与转糖基反应底物特异性可能有关的氨基酸位点,定点突变筛选获得的六种突变酶都丧失或降低了合成果聚糖的能力,均合成3-8不同聚合度的果寡糖,纯化了9种3-8聚合度寡糖,结构解析发现所有突变酶均改变了糖合成的聚合度,但不改变原始酶合成果聚糖时优势的β(2,6)区域选择性。
项目成果
期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Levan果聚糖的应用与生产研究进展
- DOI:--
- 发表时间:2013
- 期刊:生物学杂志
- 影响因子:--
- 作者:陆娟;唐俊;肖敏;屈长青
- 通讯作者:屈长青
Levan蔗糖酶及其在Levan果聚糖合成中的应用
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:微生物学报
- 影响因子:--
- 作者:陆娟;卢丽丽;肖敏
- 通讯作者:肖敏
地衣芽孢杆菌产Levan果聚糖发酵条件的优化
- DOI:--
- 发表时间:2011
- 期刊:食品科学
- 影响因子:--
- 作者:陆娟;肖敏;卢丽丽
- 通讯作者:卢丽丽
数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:{{ item.doi || "--"}}
- 发表时间:{{ item.publish_year || "--" }}
- 期刊:{{ item.journal_name }}
- 影响因子:{{ item.factor || "--"}}
- 作者:{{ item.authors }}
- 通讯作者:{{ item.author }}
数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:{{ item.authors }}
数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:{{ item.authors }}
数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:{{ item.authors }}
数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:{{ item.authors }}
数据更新时间:{{ patent.updateTime }}
其他文献
不同月龄BALB/c小鼠感染甲型H1N1型流感病毒的炎性调控差异研究
- DOI:10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004230
- 发表时间:2022
- 期刊:病毒学报
- 影响因子:--
- 作者:孙竹筠;晋一帆;刘孝云;叶冬雪;赵涛;肖敏;容蓉;杨勇
- 通讯作者:杨勇
α-氟代半乳糖的合成
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:精细化工
- 影响因子:--
- 作者:赵晗;卢丽丽;肖敏;刘军
- 通讯作者:刘军
妊娠贫血与顺产产后出血的队列研究
- DOI:--
- 发表时间:2020
- 期刊:预防医学
- 影响因子:--
- 作者:肖敏;刘洋;陶瑞雪;胡红月;王丽荣;焦雪纯;朱鹏
- 通讯作者:朱鹏
医学图像处理中可变模型技术的研究进展
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:《航天医学与医学工程》, Vol. 18, No.1, 2005.1
- 影响因子:--
- 作者:肖敏;严勇;夏顺仁
- 通讯作者:夏顺仁
我国 RD 资本存量的空间分布特征
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:科技管理研究
- 影响因子:--
- 作者:肖敏;谢富纪
- 通讯作者:谢富纪
其他文献
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:{{ item.doi || "--" }}
- 发表时间:{{ item.publish_year || "--"}}
- 期刊:{{ item.journal_name }}
- 影响因子:{{ item.factor || "--" }}
- 作者:{{ item.authors }}
- 通讯作者:{{ item.author }}

内容获取失败,请点击重试

查看分析示例
此项目为已结题,我已根据课题信息分析并撰写以下内容,帮您拓宽课题思路:
AI项目摘要
AI项目思路
AI技术路线图

请为本次AI项目解读的内容对您的实用性打分
非常不实用
非常实用
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
您认为此功能如何分析更能满足您的需求,请填写您的反馈:
肖敏的其他基金
新的具有转糖基活性的唾液酸苷酶的基因发掘、分子改造及其催化分子机制研究
- 批准号:31872626
- 批准年份:2018
- 资助金额:61.0 万元
- 项目类别:面上项目
分子进化α-L-鼠李糖苷酶及酶法合成抗肿瘤药物的鼠李糖苷研究
- 批准号:31670062
- 批准年份:2016
- 资助金额:59.0 万元
- 项目类别:面上项目
米曲霉降解尼古丁的代谢途径、酶及其基因研究
- 批准号:31170054
- 批准年份:2011
- 资助金额:59.0 万元
- 项目类别:面上项目
固氮红细菌类胡萝卜素代谢途径及其八氢番茄红素脱氢酶催化机制研究
- 批准号:30970028
- 批准年份:2009
- 资助金额:8.0 万元
- 项目类别:面上项目
具有转糖基活性的α-半乳糖苷酶的分子改造
- 批准号:30770065
- 批准年份:2007
- 资助金额:30.0 万元
- 项目类别:面上项目
双歧杆菌alpha-D-半乳糖苷酶转糖基作用的区域选择性研究
- 批准号:30170008
- 批准年份:2001
- 资助金额:18.0 万元
- 项目类别:面上项目
相似国自然基金
{{ item.name }}
- 批准号:{{ item.ratify_no }}
- 批准年份:{{ item.approval_year }}
- 资助金额:{{ item.support_num }}
- 项目类别:{{ item.project_type }}
相似海外基金
{{
item.name }}
{{ item.translate_name }}
- 批准号:{{ item.ratify_no }}
- 财政年份:{{ item.approval_year }}
- 资助金额:{{ item.support_num }}
- 项目类别:{{ item.project_type }}