奶牛乳腺黏膜抗感染免疫机制研究

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    30972225
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    31.0万
  • 负责人：
    张乃生
  • 依托单位：
    吉林大学
  • 学科分类：
    C1809.临床兽医学
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

针对疫苗被认为是防治乳腺炎的首选措施，而已有疫苗只能使乳腺感染严重程度降低、持续时间缩短、自愈率提高，但却不能阻止相同病原对乳腺的再次感染这一国内外棘手的现实难题，本项目以"乳腺黏膜免疫"，特别是"黏膜归巢"作为理论支持，拟通过建立乳腺内皮/上皮细胞血/奶屏障体外培养模型和乳腺炎发病模型作为研究工具，克隆黏膜归巢受体α4β7基因，获取α4β7纯化蛋白和抗体，通过免疫组织（细胞）化学、流式细胞分选、淋巴细胞过继输注等技术，从淋巴细胞再循环细胞归巢角度出发，以比较黏膜归巢受体和系统归巢受体淋巴细胞的粘附迁移规律为切入点，验证表达黏膜归巢受体α4β7的淋巴细胞对乳腺的免疫保护作用，从而揭示乳腺黏膜抗感染免疫机制，为乳腺炎疫苗的研究开发提供新的理论指导和实验依据。

结项摘要

奶牛乳腺炎是一种给奶牛业造成严重经济的疾病，发病率约为20～70%，每年因患乳腺炎而造成的损失约1 200～3 600元/头，因奶牛乳腺抗感染免疫机制还未完全阐明，至今仍缺乏有效的免疫防控措施。.MAdCAM-1与VCAM-1主要表达在内皮细胞等细胞表面，可与整合素受体α4β7结合介导淋巴细胞归巢。本课题对临床型乳腺炎患牛淋巴细胞表面α4β7的表达规律进行研究；研究MAdCAM-1、VCAM-1分别在健康奶牛与临床乳腺炎奶牛中的表达变化；阐明奶牛乳腺黏膜归巢地址素MAdCAM-1、VCAM-1的表达规律，为今后奶牛乳腺感染免疫的研究提供实验依据与指导。.分别合成奶牛整合素α4，β7的cDNA片段，双酶切后成功构建重组表达质粒pET28a-α4和pET28a-β7，转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达，纯化复性后免疫大鼠制备多克隆抗体，Western Blot 检测结果显示所获大鼠抗牛α4和β7抗体能够识别变性状态下的淋巴细胞表面α4和β7亚基，表明此抗体具有较好的免疫原性和反应原性。.采集患临床型乳腺炎和健康奶牛的血液及乳汁，以自制大鼠抗牛α4和兔抗牛β7多克隆抗体作为一抗，以荧光标记的抗IgG抗体为二抗，进行流式细胞仪检测，结果显示，患临床型乳腺炎的奶牛血液及乳汁中表达α4和β7双阳细胞的比率显著高于健康组奶牛（P＜0.05）。.根据GenBank中已报道的MAdCAM-1、VCAM-1基因序列，应用荧光定量PCR技术分析MAdCAM-1和VCAM-1基因分别在健康奶牛及临床乳腺炎奶牛乳腺组织内的表达变化。结果表明：MAdCAM-1、VCAM-1基因在转录水平上在临床乳腺炎奶牛乳腺组织中的表达量均高于健康奶牛。.PCR扩增MAdCAM-1基因的片段，表达载体 pGEX-4T-1相连，转化E.coli BL21(DE3)， IPTG诱导后，对表达产物进行SDS-PAGE及Western Blot分析，用纯化的重组蛋白为抗原，免疫制备多克隆抗体。结果表明，重组原核表达载体转化DE3后获得了有效表达，重组蛋白经过Western Blot验证具有反应原性，并成功制备多克隆抗体。.提取健康奶牛及临床乳腺炎奶牛乳腺组织中蛋白，以VCAM-1和MAdCAM-1蛋白多克隆抗体为一抗，经过Western Blot分析，临床乳腺炎奶牛乳腺组织中MAdCAM-1、VCAM-1蛋白表达

项目成果

期刊论文数量（8）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
牛整合素α4亚基片段的原核表达及抗体制备
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王海霞;杨正涛;陈媛媛;刘文博;张乃生
  • 通讯作者：
    张乃生
Roles of toll-like receptor 4 and immunomodulatory hormones in bovine endometritis
Toll样受体4和免疫调节激素在牛子宫内膜炎中的作用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    African Journal of Pharmacy and Pharmacology
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Liu, Shan;Zuo, Zhigang;Yang, Zhengtao;Liu, Bo;Zhang, Naisheng
  • 通讯作者：
    Zhang, Naisheng
The effect of magnolol on the toll-like receptor 4/nuclear factor kappa B signaling pathway in lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice
厚朴酚对脂多糖所致小鼠急性肺损伤中Toll样受体4/核因子κB信号通路的影响
  • DOI：
    10.1016/j.ejphar.2012.05.038
  • 发表时间：
    2012-08-15
  • 期刊：
    EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACOLOGY
  • 影响因子：
    5
  • 作者：
    Fu Yunhe;Liu Bo;Yang Zhengtao
  • 通讯作者：
    Yang Zhengtao
Prevalence and Major Pathogen Causes of Dairy Cows Subclinical Mastitis in Northeast China
东北地区奶牛隐性乳腺炎患病情况及主要病原
  • DOI：
    10.3923/javaa.2012.1278.1280
  • 发表时间：
    2012-08
  • 期刊：
    Journal of Animal and Veterinary Advances
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Chen, Yuan-Yuan;Yang, Zheng-Tao;Liu, Wen-Bo;Chang, Qiao-Cheng;Wang, Li-Guo;Zhang, Nai-Sheng
  • 通讯作者：
    Zhang, Nai-Sheng
奶牛黏附分子MadCam-1基因的克隆及原核表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国畜牧兽医
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    刘文博;陈媛媛;孙玲;李德朋;付云贺;张乃生;郭梦尧;杨正涛
  • 通讯作者：
    杨正涛

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其他文献

高剂量铜对断乳仔猪血液激素和生长因子水平的影响
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  • 通讯作者：
    刘国文
L-选择素分子结构与功能的研究进
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  • 发表时间：
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  • 期刊：
    动物医学进展,2005,26(1):1-5.
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
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  • 通讯作者：
    张乃生
奶牛乳腺的防御机制与乳腺炎病理
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    动物医学进展,2006,27(11):33-37.
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    臧丽;李英俊;张乃生
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金黄色葡萄球菌ClfA基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
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    --
  • 发表时间：
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  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    张艳晶;张乃生;杨琦;杨正涛;尹荣兰;刘辉;刘珊
  • 通讯作者：
    刘珊

其他文献

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AI项目解读示例

课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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