Le système chitinolytique de Streptosporangium roseum: régulation transcriptionnelle et diversité enzymatique

玫瑰链孢子囊几丁质分解系统：转录调节和酶多样性

• 批准号: RGPIN-2014-05177
• 负责人: Brzezinski, Ryszard
• 金额: $ 3.86万
• 依托单位: Université de Sherbrooke
• 依托单位国家: 加拿大
• 项目类别: Discovery Grants Program - Individual
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 加拿大
• 起止时间: 2014-01-01 至 2015-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://www.nserc-crsng.gc.ca/ase-oro/Details-Detailles_eng.asp?id=566997
• 关键词: Le; syst; me; chitinolytique; de

L’intérêt des chercheurs et de l’industrie pour les oligosaccharides (CHOS) dérivés de la chitine et du chitosane (forme desacétylée de la chitine) est grandissant dû aux nombreuses perspectives d’application en médecine humaine et vétérinaire, en cosmétologie, en phytoprotection etc. Les CHOS peuvent être obtenus par hydrolyse enzymatique de la chitine, mais les enzymes nécessaires sont encore peu disponibles. Une recherche bioinformatique nous a orienté vers l'actinomycète Streptosporangium roseum, dont le génome possède de nombreux gènes codant pour des enzymes chitinolytiques: chitinases GH18 et GH19; chitosanases GH8 et GH46, enzymes de type "exo" des familles GH3 et GH9 et des mono-oxygenases de la chitine (famille AA10). La plupart de ces gènes sont précédés d'une séquence palindromique similaire à celle reconnue par le répresseur csnR de Streptomyces lividans, bien caractérisé par notre laboratoire. Ce mode de régulation possible distingue S. roseum des autres actinomycètes étudiés. Cependant S. roseum possède deux répresseurs très similaires à CsnR. Il est proposé de caractériser ces deux répresseurs en purifiant les protéines respectives et en déterminant (par mesure des constantes d'affinité) leurs préférences aux diverses séquences opératrices présentes en amont des gènes chitinolytiques. Des mutants avec un ou deux represseurs délétés seront générés. Ces mutants seront étudiés par transcriptomique (Q-PCR) ainsi que par protéomique (axée sur les protéines secrétées). Nous établirons ainsi le rôle des deux répresseurs dans la régulation des gènes du complexe chitinolytique. Nous postulons que les mutants, dé-réprimés, produiront un cocktail d’enzymes chitinolytiques même en absence d’inducteur, dans des milieux de culture compatibles avec une utilisation en biotechnologie. Les enzymes du cocktail seront séparées, purifiées et caractérisées au niveau biochimique afin d’établir leur utilité pour la production de CHOS. La composition du cocktail pourra être manipulée ultérieurement par génie génétique: en inactivant certains gènes, par exemple ceux des hexosaminidases ou d'exo-chitinases de type processif, qui résulteraient en une production de monomères ou d’oligosaccharides de poids moléculaire trop faible. Aussi, des protéines exprimées de manière insuffisante pourront être exprimées à partir d'un vecteur de génie génétique de type intégratif, sous le contrôle d'un promoteur constitutif. Streptosporangium roseum donne l'oportunité de produire un ensemble complet d'enzymes chitinolytiques, hydrolysant efficacament de nombreuses formes de chitine et de chitosane. La composition de ce cocktail peut être influencée par manipulation génétique.

L'intérêt des chercheurs et de l'industrie pour lesoligogenics (CHOS) dérivés de la chitine et du chitosane (forme desacétylée de la chitine) est grandissant aux nombreuses 在人类医学和兽医、美容、植物保护方面的应用前景ETC。 Les CHOS peuvent être obtenus par Hydrolyse Enzymatique de la chitine, mais les encessaires sont encore peu disponibles.几丁质分解酶：几丁质酶 GH18 和 GH19；壳聚糖酶 GH8 和 GH46，“exo”型酶 GH3 和 GH9 和单加氧酶 de la 几丁质酶（家族 AA10）。重新研究青紫链霉菌的镇压剂，请通过我们的实验室进行研究，以区分不同放线菌的玫瑰红酵母。变种人与双镇压者Seront générés。突变体，重新启动，生产几丁质酶鸡尾酒，在缺乏诱导剂的情况下，在文化环境中与生物技术的利用相兼容。使用 CHOS 进行生产。玫瑰链孢子囊 提供完整生产机会鸡尾酒的成分对基因操纵产生影响。