Cell Biology and Imaging
细胞生物学和成像
基本信息
- 批准号:7673552
- 负责人:
- 金额:$ 30.1万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:
- 资助国家:美国
- 起止时间:至
- 项目状态:未结题
- 来源:
- 关键词:AdultAutophagocytosisCardiac MyocytesCell SurvivalCellsCellular biologyChimeric ProteinsCulture MediaDataEnvironmentFibroblastsFluorescenceFluorescence Resonance Energy TransferGenesImageIndividualInfectionLaboratoriesLifeMechanicsMembrane PotentialsMethodologyMicroscopeMicroscopyMusMuscle CellsNeonatalPreparationProteinsRattusResearch InstituteTransgenic OrganismsVentricularbasecellular imagingdensityexperiencefluorexonmethod developmentmitochondrial membraneprogramsrepositoryresearch studyskillssuccess
项目摘要
The Cell Biology and Imaging Core (Core B) which will be used by all of the Projects will be involved in
three primary functions:
1) preparation of neonatal rat ventricular myocytes (NRVMs)
2) preparation of adult mouse ventricular myocytes (AMVMs)
3) live cell imaging studies
4) distribution and analysis of results through use of the Open Microscopy Environment (OME) in
coordination with The Scripps Research Institute (TSRI)
The Cell Biology and Imaging Core (Core B) which will be used by all of the Projects will be involved in three
primary functions: 1) preparation of neonatal rat ventricular myocytes (NRVMs), 2) preparation of
adult mouse ventricular myocytes (AMVMs), and 3) live cell imaging studies. Consistent preparation of
cardiomyocytes is critical to the ability to integrate findings across the Projects in the Program. Accordingly,
while many of the individual laboratories have experience or capability in this regard, Core B will serve as a
repository to insure cell availability and cross integration. Preparation of stable neonatal rat ventricular
myocytes is relatively simple, but experimental observations are highly dependent on the methodology in
particular the separation of cardiomyocytes from fibroblasts, plating density and choice of culture medium.
With regard to adult mouse ventricular cardiomyocytes the mechanics and success of the preparation,
and in particular the yield and long term viability of these cells can require skill and consistency. A dedicated
technician and facility is therefore prerequisite to providing cells from TG and KO mice as required by
virtually every project. Core C will also facilitate in the development of methods for expressing genes through
adenoviral infection and expressing proteins through preparation and delivery of TAT fusion proteins. Live
cell imaging will also be performed by Core B. In particular, technical advice and assistance with
experiments using the FRET based Akt activity probe BKAR will be provided, as will analysis of
mitochondrial membrane potential (TMRE) and integrity (RIRR, Calcein). Support for analysis of autophagy
and mitophagy using TAT or adenoviral LC3 or cardiomyocytes from LC3 transgenics will also be provided.
Inverted fluorescence and confocal microscopes equipped for these analyses are available at both UCSD
and TSRI. The Open Microscopy Environment (OME) operated through TSRI provides a unique opportunity
for data sharing and analysis.
所有项目都将使用的细胞生物学和成像核心(核心 B)将涉及
三个主要功能:
1)新生大鼠心室肌细胞(NRVMs)的制备
2) 成年小鼠心室肌细胞(AMVMs)的制备
3) 活细胞成像研究
4) 通过使用开放显微镜环境 (OME) 来分发和分析结果
与斯克里普斯研究所 (TSRI) 协调
所有项目都将使用的细胞生物学和成像核心(核心 B)将涉及三个
主要功能:1)新生大鼠心室肌细胞(NRVM)的制备,2)
成年小鼠心室肌细胞 (AMVM),以及 3) 活细胞成像研究。一致的准备
心肌细胞对于整合该计划中各个项目的发现的能力至关重要。因此,
虽然许多个体实验室在这方面都有经验或能力,但核心 B 将作为
存储库以确保单元可用性和交叉集成。稳定新生大鼠心室的制备
肌细胞相对简单,但实验观察高度依赖于方法
特别是心肌细胞与成纤维细胞的分离、电镀密度和培养基的选择。
关于成年小鼠心室心肌细胞的制备机制和成功,
特别是这些细胞的产量和长期生存能力需要技巧和一致性。一个专门的
因此,技术人员和设施是提供 TG 和 KO 小鼠细胞的先决条件
几乎每个项目。 Core C 还将促进通过以下方式表达基因的方法的开发:
通过制备和递送 TAT 融合蛋白来进行腺病毒感染和表达蛋白。居住
细胞成像也将由 Core B 进行。特别是,技术建议和协助
将提供使用基于 FRET 的 Akt 活性探针 BKAR 的实验,以及分析
线粒体膜电位 (TMRE) 和完整性(RIRR、钙黄绿素)。支持自噬分析
还将提供使用 TAT 或腺病毒 LC3 或来自 LC3 转基因的心肌细胞的线粒体自噬。
加州大学圣地亚哥分校 (UCSD) 均提供用于这些分析的倒置荧光和共焦显微镜
和 TSRI。通过 TSRI 运营的开放显微镜环境 (OME) 提供了独特的机会
用于数据共享和分析。
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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