生殖幹細胞を用いた希少鳥類の長期保存・再生システム構築

利用生殖干细胞建立珍稀鸟类长期保存和再生体系

基本信息

批准号：
13J00353
负责人：
中島友紀
金额：
$ 1.47万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ニワトリ生殖細胞における胚発生に伴う遺伝子発現変動の解析を行った。昨年度にマイクロアレイを用いて網羅的に解析したニワトリ生殖細胞の遺伝子発現について、ニワトリ胚の生殖細胞から抽出したRNAを用い、リアルタイムPCR法を用いることにより遺伝子発現を解析した。その結果、雌雄の生殖細胞の遺伝子発現は胚発生に伴い変動していることが示された。次に、1細胞移植法を用いたニワトリ胚の生殖巣生殖細胞の移住能および増殖能を解析した。その結果、生殖細胞の移住能および増殖能は雌雄で異なり、また個々の細胞間で増殖能に差異が存在することが明らかになった。さらに、ニホンコウノトリおよびホオアカトキ生殖細胞をニワトリ胚に移植することによる生殖系列キメラ胚の作製を試みた。まず、それぞれの胚から分離した生殖細胞を蛍光標識し、ニワトリ2日胚の背側大動脈に移植した。移植5日後、ニワトリ胚の生殖巣および中腎に存在する蛍光標識を示しかつ形態的に生殖細胞の特徴を示す細胞数を測定した。その結果、ニホンコウノトリおよびホオアカトキ生殖細胞はニワトリ胚生殖巣への移住能を有することが明らかになった。また、移植された細胞数に対する生殖巣および中腎への移住率を比較すると、ニホンコウノトリおよびホオアカトキ生殖細胞を移植した場合、ニワトリ生殖細胞を移植した場合に対し、生殖巣への移住率が低くなることが示された。最後に、メス分化抑制生殖細胞の作製を試みた。ニワトリ雌胚にアロマターゼ阻害剤を添加することにより、卵巣分化を阻害した個体から生殖細胞を単離し、その遺伝子発現および増殖能を解析した。その結果、アロマターゼ阻害剤を添加した雌胚における生殖細胞の遺伝子発現は、同発生段階の雌胚の生殖細胞における遺伝子発現および増殖能とは異なることが示された。このことから、卵巣分化が雌性生殖細胞の性質に影響することが示唆された。

我们分析了与鸡生殖细胞胚胎发育相关的基因表达变化。去年利用微阵列对鸡生殖细胞中的基因表达进行了全面分析，现在使用从鸡胚胎生殖细胞中提取的RNA进行实时PCR分析。结果表明，雄性和雌性生殖细胞中的基因表达随着胚胎发育而变化。接下来，我们利用单细胞移植方法分析了鸡胚胎中性腺生殖细胞的迁移和增殖能力。结果显示，雄性和雌性生殖细胞的迁移和增殖能力存在差异，并且个体细胞之间的增殖能力也存在差异。此外，我们尝试通过将日本鹳和巨鹮生殖细胞移植到鸡胚胎中来创建种系嵌合胚胎。首先，从每个胚胎中分离出的生殖细胞被荧光标记并移植到两天大的鸡胚胎的背主动脉中。移植后五天，测量鸡胚性腺和中肾中存在的细胞数量，这些细胞表现出荧光标记并在形态上表现出生殖细胞的特征。结果发现，日本鹳和日本白鹮的生殖细胞具有迁移到鸡胚胎性腺的能力。另外，当比较相对于移植细胞数量向性腺和中肾的迁移率时，移植日本鹳和巨鹮生殖细胞时向性腺的迁移率低于移植鸡生殖细胞时的迁移率。已经证明这将会发生。最后，我们尝试创造抑制雌性分化的生殖细胞。从添加芳香酶抑制剂抑制卵巢分化的鸡雌性胚胎中分离生殖细胞，分析其基因表达和增殖能力。结果表明，芳香酶抑制剂处理的雌性胚胎生殖细胞的基因表达与同一发育阶段雌性胚胎生殖细胞的基因表达和增殖潜力不同。这表明卵巢分化影响女性生殖细胞的特性。