ストレスと睡眠指標との関連　腸内神経叢の関与

压力与睡眠指标的关系：肠神经丛的参与

基本信息

批准号：
22K18667
负责人：
本多真
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

ストレス感受性には心理的要因だけでなく生物学的要因も関与する。腸内細菌叢はストレス感受性の一つの規定因子とされている。本研究では生物学的ストレス指標として、酸化ストレス指標かつ睡眠物質であるグルタチオン（GSH/GSSG）に注目し、酸化ストレス指標が睡眠の質にどのように影響するのか、さらに腸内細菌叢がストレス感受性と関連する環境因となるか検討することを目的とする。過眠症の鑑別診断目的で1泊２日の検査入院[睡眠ポリグラフ検査(PSG)-反復睡眠潜時検査(MSLT)]をする症例に過眠症病態研究への協力を依頼し、入院期間中に血液と糞便の収集を行う。2022.4-2023.3の期間に118例の患者が研究に同意し、血液92検体、糞便28検体を収集できた。糞便はリボソームRNA領域の増幅を行いT-RFLP(Terminal-Restriction Fragment Length Polymorphism)法で腸内細菌の系統分類解析および糞便中の短鎖脂肪酸定量を行った(テクノスルガラボに委託)。委託が年度末となったため結果は2023.4には未着となった。解析は2023年度に行う。血中の酸化ストレス指標(GSH、GSSG)は高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によって検出・定量を行う。以前、脳脊髄液中のGSH/GSSGはホウ素ドープダイアモンド電極を用いたHPLC系で安定して測定可能であったが、血漿には夾雑物が多く適応できず、赤血球分画を対象とするとGSH濃度が非常に低値でアッセイ間の変動が大きい課題が判明した。試行錯誤を行い、最終的にGSHは、赤血球分画を解凍・除タンパク処理直後にHPLCにかけることで、信頼できる実験系を確立ができた。しかし１検体ずつ処理する必要が生じ、所要時間が延長してたため、まだ収集された検体の半数以下しか解析できていない。順次処理を進め、解析を行う予定である。

应激敏感性不仅涉及心理因素，还涉及生物因素。肠道微生物群被认为是应激敏感性的决定因素之一。在这项研究中，我们重点关注谷胱甘肽（GSH/GSSG），它是一种氧化应激指标和睡眠物质，作为生物应激指标，本研究的目的是检查环境因素是否与易感性相关。为了鉴别诊断嗜睡症，我们要求住院1晚2天的患者【多导睡眠图（PSG）-重复睡眠潜伏期测试（MSLT）】配合进行嗜睡症发病机制的研究，并要求他们配合收集血液和粪便的病理学研究。 2022.4-2023.3期间，118名患者同意研究，可采集92份血液样本和28份粪便样本。扩增粪便核糖体RNA区域，利用T-RFLP（末端限制性片段长度多态性）方法分析肠道细菌的系统发育分类，并对粪便中的短链脂肪酸进行定量（外包给Techno）骏河实验室）。由于该委托是在本财年末完成的，因此直到 2023 年 4 月才收到结果。该分析将于 2023 年进行。使用高效液相色谱 (HPLC) 检测和定量血液中的氧化应激指标（GSH、GSSG）。此前，使用掺硼金刚石电极的HPLC系统可以稳定地测量脑脊液中的GSH/GSSG，但血浆中含有许多杂质，无法应用，而当针对红细胞部分时，GSH的问题被确定为浓度非常低并且测定之间的差异很大。经过反复试验，GSH 最终能够建立一个可靠的实验系统，将红细胞组分在解冻和去除蛋白质后立即进行 HPLC。然而，由于需要对每个样本进行逐一处理，并且所需时间延长，因此仅对收集到的样本进行了不到一半的分析。我们计划按顺序进行处理并进行分析。