塩基部修飾核酸による低毒性かつ高活性なアンチセンス核酸の創製

使用碱基修饰的核酸创建低毒性和高活性的反义核酸

基本信息

批准号：
22KJ2142
负责人：
三上敦士
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2142/
关键词：
核酸医薬核酸化学アンチセンス核酸毒性

项目摘要

申請テーマである「塩基部修飾核酸による低毒性かつ高活性なアンチセンス核酸の創製」において効率的な塩基部修飾核酸の合成が重要である。そこで、修飾核酸ライブラリーを薗頭反応によって簡便に構築する手法の開発に取り組んだ。副反応が進行してしまうために目的オリゴヌクレオチドの単離収率は30%程度にとどまったが、薗頭反応のパラジウムカップリング自体は80%程度と良好な収率で進行していた。収率が低いためにアンチセンス核酸の生物活性試験用ライブラリー構築には適さなかったが、物性評価用のライブラリー構築には適用できると考えられ、アンチセンス核酸の二重鎖形成能を複数の塩基部修飾核酸において評価した。詳細な結果については日本薬学会第143年会にて発表し、論文投稿の準備を進めている。次に、複数の塩基部修飾核酸を合成し、それぞれアンチセンス核酸へと導入した。導入する化学修飾に関しては、1,6-ヘキサンジオールやリポ酸などの液液相分離阻害能を有すると報告されている低分子の構造を模倣し、6炭素程度の脂肪鎖にカルボン酸やジオールを持つ構造などを主に採用することとした。現在、合成したアンチセンス核酸の細胞動態や毒性に関する生物学的試験を進めている。また、核内構造体パラスペックルに関して精力的に研究をされている先生と共同研究を実施することになり、パラスペックルが核内においてアンチセンス核酸の毒性とどのような機構で関わりを持っているのかについても明らかにする予定である。また、アンチセンス核酸の毒性発現機構に関する文献調査の結果を核酸医薬学会第7回年会にて総説講演という形で発表した。多くの質問を頂き非常に有意義な議論となったと感じており、アンチセンス核酸の毒性に多くの研究者が注目しているという印象を強く受けた。

碱基修饰核酸的高效合成对于“使用碱基修饰核酸创建低毒性和高活性反义核酸”这一应用主题非常重要。因此，我们致力于开发一种利用园头反应轻松构建修饰核酸文库的方法。虽然由于副反应的进行，目标寡核苷酸的分离收率保持在约30%，但Sonogashira反应中的钯偶联本身以约80%的良好收率进行。虽然由于产量低，不适合构建用于反义核酸生物活性测试的文库，但认为它可以应用于构建用于物理性质评估的文库，对碱基修饰的核酸进行评价。详细结果将在第143届日本药学会年会上公布，论文提交的准备工作正在进行中。接下来，合成多个碱基修饰的核酸，并将每个核酸引入反义核酸中。关于所引入的化学修饰，我们模仿了据报道具有抑制液-液相分离能力的低分子结构，例如1,6-己二醇和硫辛酸，并在其脂肪链上添加了羧酸和二醇。我们决定主要采用具有 6 个碳的结构。我们目前正在对合成的反义核酸的细胞动力学和毒性进行生物学测试。此外，我们将与一位正在积极研究核结构paraspeckles的教授进行联合研究，我们将研究paraspeckles与细胞核中反义核酸的毒性相关的机制，我们还计划澄清是否如此。情况就是如此。另外，我们在第七届核酸药学会年会上以综述讲座的形式展示了反义核酸毒性机制的文献调查结果。我觉得这次讨论很有意义，收到了很多问题，我强烈的印象是很多研究人员都在关注反义核酸的毒性。