温度感受性ゲルを担体用いた浮遊培養による正常肝細胞の増殖と分化の制御

温敏凝胶为载体悬浮培养控制正常肝细胞的增殖和分化

基本信息

批准号：
08750915
负责人：
酒井康行
金额：
$ 0.7万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ポリイソプロピルアクリルアミドを主体とした温度感受性ゲルからなるビーズ担体を開発し,これを利用した浮遊培養によって,正常ラット肝細胞の増殖・分化(スフェロイド形成)の制御を大規模に行う手法を確立することを最終目的として,研究を行った.通常のディッシュを用いる平板培養によって,上記の目的を満たす組成のゲル(イソポリアクリルアミドと特殊なモノマーとの共重合体,(株)興人に合成を依頼)を開発した.最終的に開発したゲルは,37℃のホットプレート上ばかりでなく,室温(25℃)でも固体状態で安定であった.細胞付着性の改善のためには,細胞付着伸展因子であるファイブネクチンによる表面被覆が必要とされた.このゲル上にラット肝細胞を低密度で播種し,上皮成長因子とインシュリンを添加すると,約2日間で約1.5-1.7倍に増殖した.この表面に細胞が増殖したゲルを氷浴に約10分放置することにより,細胞シートは剥離した.このシートを小規模の浮遊培養(旋回培養)を1日間行うことで,肝細胞凝集体(スフェロイド)へと組織化できた.このスフェロイドへの組織化過程では,細胞数の減少は見られなかったので,播種細胞の1.5-1.7倍の細胞数からなるスフェロイドを調製できたことになる.通常,旋回培養では播種細胞のスフェロイドへの組織化率は60%程度であるので,本研究で開発したゲル上での増殖過程を経ることによって,2倍以上の細胞数からなるスフェロイドが得られたことになる(一部をCytotechnology誌に投稿,現在印刷中).その後,同一組成のゲルのビーズ化に関する検討を行ったが,ビーズ状に分散したゲルが浮遊状態で付着成長してしまうという技術的困難に遭遇し,現在さらに検討を進めている.

开发由主要成分为聚异丙基丙烯酰胺的温度敏感凝胶制成的珠载体，并建立通过使用该珠载体的悬浮培养大规模控制正常大鼠肝细胞的增殖和分化（球状体形成）的方法。作为最终目标，我们通过使用普通培养皿的平板培养制备了具有满足上述目标的组成的凝胶（异聚丙烯酰胺和特殊单体的共聚物，由Koko Co., Ltd.制造）。最终开发的凝胶不仅在 37°C 的热板上而且在室温 (25°C) 下都以固态稳定，是细胞粘附延长因子。需要将大鼠肝细胞以低密度接种在该凝胶上，当添加表皮生长因子和胰岛素时，它们在约2天内增殖约1.5-1.7倍。将增殖的凝胶在冰浴中放置约10分钟，使细胞片剥离。通过对该片进行小规模悬浮培养(旋转培养)1天，将其组织成肝细胞聚集体(球状体)。能够转换这个。在组织成球体的过程中，没有观察到细胞数量减少，这意味着可以制备出由种子细胞1.5-1.7倍的细胞组成的球体。通常，在旋转培养中，种子细胞不会减少细胞数量。形成球体。组织率约为60%，因此通过在本研究中开发的凝胶上进行生长过程，获得了由两倍以上细胞数量组成的球体（其中一些发表在《细胞技术》杂志上）。研究了将相同成分的凝胶形成珠子，但我们遇到了技术困难，因为分散在珠子中的凝胶会在悬浮状态下粘附和生长，因此我们目前正在进一步研究。