光造型技術と胎児肝細胞を用いた血管構造を持つin vitro肝組織再構築

利用立体光刻技术和胎儿肝细胞进行具有血管结构的体外肝组织重建

基本信息

批准号：
02F00161
负责人：
酒井康行
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)複雑な内部構造を持つ生体吸収性樹脂の三次元微細造型,および,(2)胎児肝細胞の増殖と分化の制御,の2つの側面から検討を行った.(1)については,前年度までに確立したポリ乳酸多孔質シート積層・流路切削加工法によってマウスの全肝とほぼ同じ1.3mLの担体を作成し,それを用いてin vitroでヒト肝ガン由来Hep G2細胞の灌流培養を行った.その結果,マクロな流路を切削加工することで,細胞の増殖と機能発現を大きく向上させることを確かめた.(2)については,前年度までに確立した胎児マウス肝細胞の培養条件下(ニコチンアミド・DMSO・オンコスタチンMの三因子共存)でポリ乳酸三次元担体を用いて作成した組織を,70%肝切除同系マウスに移植,そのin vivoでの性能を評価した.その結果,2週間程度のin vitro分化誘導にて肝前駆細胞集団を格段に増幅していくことが,移植1ヵ月後の肝組織の再構築を大幅に改善することが明らかとなった.(2)については,確立したin vitro分化誘導条件のラット胎児肝細胞・購入した継代ヒト胎児肝細胞について,その適用可能性を調べた.その結果,ラットに関してはマウスと同様の培養条件が,同じくin vitroでの肝前駆細胞の分化誘導にとって極めて効果的であった.一方,ヒトについては,オンコスタチンMと三次元培養との組み合わせが有効であった.以上,マウスやラット胎児肝由来の肝前駆細胞を利用した新規in vitro再構築型肝組織開発にとって,重要な基礎的知見を得ることができた.

我们研究了两个方面：（1）具有复杂内部结构的生物可吸收树脂的三维微加工，以及（2）胎儿肝细胞增殖和分化的控制。关于（1），使用聚乳酸多孔片层压和通道。在去年建立的切割方法中，我们制作了一个1.3 mL的载体，几乎与整个小鼠肝脏相同，并用它来体外培养人肝癌来源的Hep细胞。我们对G2细胞进行了灌注培养，结果证实，在胎鼠肝细胞培养条件下（三因子烟酰胺共存），切割宏观流道极大地改善了细胞增殖和功能表达。、DMSO和制瘤素M）被移植到70％肝切除的同基因小鼠中，并在体外我们评估了其体内性能。结果表明，通过体外分化诱导约2周显着扩增肝祖细胞群，可显着改善移植后1个月的肝组织重建。关于（2），我们研究了大鼠胎儿肝脏的适用性。也使用在已建立的体外分化诱导条件下的细胞和购买的传代培养的人胎肝细胞，培养条件类似于小鼠的培养条件。它在体外诱导肝祖细胞分化方面非常有效，而在人类中，制瘤素M与三维培养物的结合是有效的，因此我们能够获得开发新细胞的重要基础知识。使用细胞体外重建肝组织。